17-10112

ChIPAb+ Acetyl Histone H3 (Lys23) - przeciwciało z walidacją ChIP i zestaw primerów

serum, from rabbit

• Synonim(y): H3K23Ac, histon H3 (acetyl K23)
• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.52
• eCl@ss: 32160702
• Clone: polyclonal
• Species reactivity: Saccharomyces cerevisiae, human, yeast
• Application: ChIP, IP, WB
• Citations: 2

Właściwości

• biological source: rabbit
• Quality Level: 100
• antibody form: serum
• clone: polyclonal
• species reactivity: Saccharomyces cerevisiae, human, yeast
• species reactivity (predicted by homology): vertebrates (most common)
• manufacturer/tradename: ChIPAb+, Upstate^®
• technique(s): ChIP: suitable, immunoprecipitation (IP): suitable, western blot: suitable
• NCBI accession no.: NM_003493
• UniProt accession no.: Q16695
• shipped in: dry ice

Opis

General description

17kDa

Histon H3 jest jednym z pięciu głównych białek histonowych zaangażowanych w strukturę chromatyny w komórkach eukariotycznych. Posiadając główną domenę globularną i długi N-końcowy ogon, H3 jest zaangażowany w strukturę nukleosomów o strukturze "koralików na sznurku".

N-końcowy ogon histonu H3 wystaje z kulistego rdzenia nukleosomu i może podlegać kilku różnym rodzajom modyfikacji epigenetycznych, które wpływają na procesy komórkowe. Modyfikacje te obejmują kowalencyjne przyłączanie grup metylowych lub acetylowych do aminokwasów lizyny i argininy oraz fosforylację seryny lub treoniny.

Wszystkie przeciwciała ChIPAb+ są indywidualnie walidowane pod kątem wytrącania chromatyny, w każdej partii, za każdym razem. Każdy zestaw przeciwciał ChIPAb+ zawiera startery kontrolne (testowane co partię za pomocą qPCR) w celu biologicznej walidacji wyników IP w kontekście specyficznym dla locus. Protokół qPCR i sekwencje starterów są dostarczane, umożliwiając badaczom walidację protokołów ChIP przy użyciu naszego przeciwciała w kontekście chromatyny. Każdy zestaw zawiera również ujemne przeciwciało kontrolne, aby zapewnić specyficzność reakcji ChIP.
Zestaw ChIPAb+ Acetyl Histone H3 (Lys23) zawiera przeciwciało Acetyl Histone H3 (Lys23), normalną surowicę króliczą i startery kontrolne, które amplifikują region 166 bp ludzkiego promotora GAPDH. Acetyl Histone H3 (Lys23) i kontrole ujemne są dostarczane w skalowalnym rozmiarze reakcji "per ChIP" i mogą być wykorzystane do funkcjonalnej walidacji wytrącania chromatyny związanej z acetylo-histonem H3 (Lys23).

Immunogen

Syntetyczny peptyd sprzężony z owalbuminą (_{KQLASAcKAARK-C}) odpowiadający aminokwasom 18-27 drożdżowego histonu H3 acetylowanego na lizynie 23 z C-końcową cysteiną dodaną do celów koniugacji.

Application

Immunoprecypitacja chromatyny:
Reprezentatywne dane partii.
Sonikowaną chromatynę przygotowaną z komórek HeLa (1 X 10E6 równoważników komórek na IP) poddano immunoprecypitacji chromatyny przy użyciu 2 µL normalnej surowicy króliczej lub 2 µL anty-acetylo-histonu H3 (Lys23) i zestawu Magna ChIP^® A (nr kat. 17-610). Pomyślna immunoprecypitacja fragmentów DNA związanych z acetylo-Histonem H3 (Lys23) została zweryfikowana za pomocą qPCR przy użyciu starterów kontrolnych specyficznych dla ludzkiego regionu promotora GAPDH jako locus dodatniego i starterów MyoD jako locus ujemnego. Dane przedstawiono jako procentowy wkład każdej próbki IP w stosunku do chromatyny wejściowej dla każdego amplikonu i próbki ChIP, jak wskazano.
Szczegółowe informacje dotyczące eksperymentu można znaleźć w protokole EZ-Magna ChIP A (nr kat. 17-408) lub EZ-ChIP (nr kat. 17-371).
Analiza Western Blot:
Reprezentatywne dane partii.
Ekstrakty kwasowe z komórek HeLa poddanych działaniu maślanu sodu (Lane 1, nr kat. 17-305) i rekombinowany histon H3 (Lane 2, nr kat. 14-494) poddano sondowaniu anty-acetylo-histonem H3 (Lys23) (rozcieńczenie 1:100 000).
Strzałka wskazuje acetylo-histon H3 (~17 kDa)
Dot Blot:
Reprezentatywne dane partii.
40 ng i 4 ng peptydów histonowych z różnymi modyfikacjami (patrz tabela 1) przeniesiono na membranę PVDF i sondowano przeciwciałem anty-acetylo-histonowym H3 (Lys23) (rozcieńczenie 1:2000). Białka wizualizowano przy użyciu koziej anty-króliczej IgG sprzężonej z HRP i systemu detekcji chemiluminescencji. Pokazano obraz z 60-sekundowej ekspozycji.

Zestaw ChIPAb+ Acetyl Histone H3 (Lys23) -ChIP Validated Antibody & Primer Set zawiera przeciwciało i specyficzne kontrolne startery PCR.

Research Category
Epigenetics & Nuclear Function

Biochem/physiol Actions

Histon H3 acetylowany na lizynie 23. Nie rozpoznaje nieacetylowanego rekombinowanego histonu H3.

Packaging

25 testów w zestawie. Zalecane użycie: ~2 μL przeciwciała na immunoprecypitację chromatyny (w zależności od kontekstu biologicznego).

Physical form

Anty-Acetyl Histone H3 (Lys23) (królik poliklonalny). Jedna fiolka z 50 µL surowicy króliczej zawierającej 0,05% azydku sodu i 30% glicerolu. Przechowywać w temperaturze -20°C.
Normalna surowica królicza. Jedna fiolka 100 μL surowicy odpornościowej zawierającej 0,05% azydku sodu. Przechowywać w temperaturze -20°C.
Primery kontrolne, ludzki promotor GAPDH. Jedna fiolka zawierająca 75 μL po 5 μM starterów specyficznych dla ludzkiego promotora GAPDH. Przechowywać w temperaturze -20°C.
FOR: TAC TAG CGG TTT TAC GGG CG
REV: TCG AAC AGG AGC AGA GAG CGA

Preparation Note

Przechowywać przez 1 rok w temperaturze -20°C od daty otrzymania. Zalecenia dotyczące postępowania: Po pierwszym rozmrożeniu, a przed zdjęciem korka, odwirować fiolkę i delikatnie wymieszać roztwór. Rozdzielić do probówek mikrowirówkowych i przechowywać w temperaturze -20°C. Unikać powtarzających się cykli zamrażania/rozmrażania, które mogą uszkodzić IgG i wpłynąć na działanie produktu.
Uwaga: Zmienność temperatur w zamrażarce poniżej -20°C może powodować zamarzanie roztworów zawierających glicerol podczas przechowywania.

Analysis Note

Kontrola
Zawiera normalną surowicę króliczą i startery specyficzne dla ludzkiego promotora GAPDH.

Chromatin Immunoprecipitation:
Representative lot data.
Sonicated chromatin prepared from HeLa cells (1 X 10E6 cell equivalents per IP) were subjected to chromatin immunoprecipitation using 2 µL of either normal rabbit serum, or 2 µL Anti-acetyl-Histone H3 (Lys23) and the Magna ChIP^® A Kit (Cat. # 17-610). Successful immunoprecipitation of acetyl-Histone H3 (Lys23) associated DNA fragments was verified by qPCR using Control Primers specific for the human GAPDH promoter region
Please refer to the EZ-Magna ChIP A (Cat. # 17-408) or EZ-ChIP (Cat. # 17-371) protocol for experimental details.

Legal Information

MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

Unless otherwise stated in our catalog or other company documentation accompanying the product(s), our products are intended for research use only and are not to be used for any other purpose, which includes but is not limited to, unauthorized commercial uses, in vitro diagnostic uses, ex vivo or in vivo therapeutic uses or any type of consumption or application to humans or animals.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Klasa składowania: 10 - Combustible liquids
• wgk: WGK 1