17-10241

ChIPAb+ Acetylo-Histone H3 (Lys9/18) - przeciwciało i zestaw primerów z walidacją ChIP

serum, from rabbit

• Synonim(y): H3K9/18Ac, histon H3 (acetyl K9/18)
• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.52
• eCl@ss: 32160702
• Clone: polyclonal
• Species reactivity: mouse, bovine, Saccharomyces cerevisiae, human
• Application: ChIP, WB
• Citations: 3

Właściwości

• biological source: rabbit
• Quality Segment: 100
• antibody form: serum
• clone: polyclonal
• species reactivity: mouse, bovine, Saccharomyces cerevisiae, human
• manufacturer/tradename: ChIPAb+, Upstate^®
• technique(s): ChIP: suitable, western blot: suitable
• NCBI accession no.: NM_003493
• UniProt accession no.: Q16695
• shipped in: dry ice
• Gene Information: human ... H3F3B(3021)

Opis

General description

17 kDa

Histon H3 jest jednym z 5 głównych białek histonowych zaangażowanych w strukturę chromatyny w komórkach eukariotycznych. Posiadając główną domenę globularną i długi ogon N-końcowy, histon H3 jest zaangażowany w strukturę nukleosomów o strukturze "koralików na sznurku".

Acetylacja histonu H3 zachodzi w kilku różnych pozycjach lizyny w ogonie histonu i jest wykonywana przez rodzinę enzymów znanych jako acetylotransferazy histonowe (HAT).

Wszystkie przeciwciała ChIPAb+ są indywidualnie walidowane pod kątem wytrącania chromatyny, w każdej partii, za każdym razem. Każdy zestaw przeciwciał ChIPAb+ zawiera startery kontrolne (testowane co partię za pomocą qPCR) w celu biologicznej walidacji wyników IP w kontekście specyficznym dla locus. Protokół qPCR i sekwencje starterów są dostarczane, umożliwiając badaczom walidację protokołów ChIP przy użyciu naszego przeciwciała w kontekście chromatyny. Każdy zestaw zawiera również ujemne przeciwciało kontrolne, aby zapewnić specyficzność reakcji ChIP.
Zestaw ChIPAb+ Acetylo-Histone H3 (Lys9/18) zawiera przeciwciało Acetylo-Histone H3 (Lys9/18), normalną surowicę króliczą i startery kontrolne, które amplifikują region 166 bp ludzkiego promotora GAPDH. Acetylo-Histon H3 (Lys9/18) i kontrole ujemne są dostarczane w skalowalnym rozmiarze reakcji "na ChIP" i mogą być wykorzystane do funkcjonalnej walidacji wytrącania chromatyny związanej z Acetylo-Histonem H3 (Lys9/18).

Immunogen

Epitop: Acetylowana Lys9/18

Syntetyczny peptyd sprzężony z KLH (..ARAcKSTGGKAPRAcKQL..), w którym AcK odpowiada acetylo-lizynie przy resztach 9 i 18 ludzkiego histonu H3.

Application

Immunoprecypitacja chromatyny:
Reprezentatywne dane partii.
Sonikowaną chromatynę przygotowaną z komórek HeLa (1 X 10E6 równoważników komórek na IP) poddano immunoprecypitacji chromatyny przy użyciu 1 µL normalnej surowicy króliczej lub 1 µL anty-acetylo-histonu H3 (Lys9/18) i zestawu Magna ChIP^® A (nr kat. 17-610). Pomyślna immunoprecypitacja fragmentów DNA związanych z acetylo-Histonem H3 (Lys9/18) została zweryfikowana za pomocą qPCR przy użyciu starterów kontrolnych specyficznych dla ludzkiego regionu promotora GAPDH jako locus dodatniego i ludzkich starterów β-globiny jako locus ujemnego. (Rysunek 2). Dane przedstawiono jako procentowy wkład każdej próbki IP w stosunku do chromatyny wejściowej dla każdego amplikonu i próbki ChIP, jak wskazano.
Szczegółowe informacje dotyczące eksperymentu można znaleźć w protokole EZ-Magna ChIP A (nr kat. 17-408) lub EZ-ChIP (nr kat. 17-371).
Analiza Western Blot:
Reprezentatywne dane partii.
Ekstrakty kwasu z nietraktowanych (pas 1), traktowanych maślanem sodu (pas 2, nr kat. 17-305) komórek HeLa i rekombinowany Histone
H3, (pas 3, nr katalogowy 14-411) zostały rozdzielone metodą elektroforezy, przeniesione na nitrocelulozę i wysondowane anty-acetylo-histonem H3 (Lys9/18) (rozcieńczenie 1:5000). Białka uwidoczniono przy użyciu koziego przeciwciała drugorzędowego przeciw królikowi sprzężonego z HRP i systemu detekcji chemiluminescencji.
Strzałka wskazuje acetylo-histon H3 (Lys9/18) (~17 kDa). (Rysunek 3).
Beadlyte Test swoistości histonowo-peptydowej:
Reprezentatywne dane partii.
Rozcieńczenia 1:1,000-1:40,000 anty-acetylo-histonu H3 (Lys9/18) inkubowano z koktajlem mikrosfer sprzężonych z peptydami histonu H3 z następującymi modyfikacjami:
1. acetylo-lizyna 4
2. acetylo-lizyna 14
3. acetylo-lizyna 9
4. acetylo-lizyna 18
5. Bez modyfikacji, zawierające aa 1-20
Niezwiązane przeciwciało usunięto przez filtrację. Kompleksy peptyd-przeciwciało inkubowano z drugorzędowym przeciwciałem anty-mysim sprzężonym z biotyną, a następnie inkubowano z koniugatem fikoerytryna-streptawidyna.
Fluorescencję odczytano na urządzeniu Luminex 100. Mediana
intensywności fluorescencji (MFI). (Rysunek 4).

Zestaw ChIPAb+ Acetyl-Histone H3 (Lys9/18) -ChIP Validated Antibody & Primer Set zawiera przeciwciało i specyficzne kontrolne startery PCR.

Research Category
Epigenetics & Nuclear Function

Research Sub Category
Histones

Biochem/physiol Actions

Oczekiwana szeroka reaktywność krzyżowa gatunków

Rozpoznaje histon H3 acetylowany na lizynach 9 i 18.

Packaging

25 testów w zestawie. Zalecane użycie: ~1 μL przeciwciała na immunoprecypitację chromatyny (w zależności od kontekstu biologicznego).

Physical form

Anty-Acetylo-Histon H3 (Lys9/18) (królicza poliklonalna), . Jedna fiolka zawierająca 25 µl króliczej surowicy odpornościowej zawierającej 0,05% azydku sodu przed dodaniem glicerolu do 30%. Przechowywać w temperaturze -20°C.
Normal Rabbit Serum, . Jedna fiolka zawierająca 25 μL surowicy odpornościowej zawierającej 0,05% azydku sodu. Przechowywać w temperaturze -20°C.
Primery kontrolne, ludzki promotor GAPDH, . Jedna fiolka zawierająca 75 μL po 5 μM każdego primera specyficznego dla ludzkiego GAPDH. Przechowywać w temperaturze -20°C.
FOR: TAC TAG CGG TTT TAC GGG CG
REV: TCG AAC AGG AGC AGA GAG CGA

Unpurified

Preparation Note

Przechowywać przez 1 rok w temperaturze -20°C od daty otrzymania. Zalecenia dotyczące postępowania: Po pierwszym rozmrożeniu, a przed zdjęciem korka, odwirować fiolkę i delikatnie wymieszać roztwór. Rozdzielić do probówek mikrowirówkowych i przechowywać w temperaturze -20°C. Unikać powtarzających się cykli zamrażania/rozmrażania, które mogą uszkodzić IgG i wpłynąć na działanie produktu.
Uwaga: Zmienność temperatur w zamrażarce poniżej -20°C może powodować zamarzanie roztworów zawierających glicerol podczas przechowywania.

Analysis Note

Kontrola
Zawiera normalną surowicę króliczą i startery specyficzne dla ludzkiego promotora GAPDH.

Chromatin Immunoprecipitation:
Representative lot data.
Sonicated chromatin prepared from HeLa cells (1 X 10E6 cell equivalents per IP) were subjected to chromatin immunoprecipitation using 1 µL of either Normal Rabbit Serum,or 1 µL of Anti-Acetyl-Histone H3 (Lys9/18) and the Magna ChIP^® A Kit (Cat. # 17-610). Successful immunoprecipitation of Acetyl-Histone H3 (Lys9/18) associated DNA fragments was verified by qPCR using Control Primers specific for the human GAPDH promoter region as a positive locus (Figure 1). Please refer to the EZ-Magna ChIP A (Cat. # 17-408) or EZ-ChIP (Cat. # 17-371) protocol for experimental details.

Legal Information

MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

Unless otherwise stated in our catalog or other company documentation accompanying the product(s), our products are intended for research use only and are not to be used for any other purpose, which includes but is not limited to, unauthorized commercial uses, in vitro diagnostic uses, ex vivo or in vivo therapeutic uses or any type of consumption or application to humans or animals.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Klasa składowania: 10 - Combustible liquids
• wgk: WGK 2