Diagnostyczne procedury immunohistochemiczne

Diagnostyczna immunohistochemia (IHC) to zbiór różnych technik opracowanych w celu identyfikacji nieprawidłowości w tkankach, ustalenia prognoz i wskazania opcji terapeutycznych. Podstawową zasadą diagnostycznej IHC jest reakcja wiązania antygenu z przeciwciałem, w której przeciwciało znakowane enzymem lub barwnikiem fluorescencyjnym jest wykorzystywane do wizualizacji lokalizacji i dystrybucji określonego antygenu w tkankach lub skrawkach tkanek. Chociaż barwienie histologiczne było głównym narzędziem analitycznym przez ponad sto lat, kilka ulepszeń w immunohistochemii diagnostycznej (IHC) i analizach molekularnych zrewolucjonizowało dziedzinę nowoczesnej patologii klinicznej.

• Diagnostyczna IHC i patologia kliniczna
• Diagnostyczne IHC i nowotwory
• Diagnostyczne IHC i czynniki zakaźne

Diagnostyka IHC i patologia kliniczna

IHC jest dostępna jako część rutynowej usługi w ogólnych laboratoriach patologicznych, zapewniając wygodne narzędzie analityczne i diagnostyczne. Chociaż diagnostyka kliniczna nadal w dużej mierze opiera się na standardowym barwieniu tkanek, takim jak hematoksylina i eozyna (H&E), istnieje wiele sposobów, w jakie IHC pomaga patologom w wykrywaniu problematycznych przypadków. Diagnostyczne barwienie immunologiczne jest regularnie stosowane do identyfikacji wczesnych subtelnych zmian morfologicznych lub rozwojowych komórek, takich jak proliferacja lub apoptoza. Przeciwciała kliniczne mogą identyfikować poszczególne linie komórkowe poprzez wiązanie specyficznych białek markerowych. Ta specyficzność przeciwciał może również skutkować fałszywie dodatnimi/fałszywie ujemnymi wynikami, ponieważ immunobarwienie jest wrażliwe na obróbkę tkanek, konserwację i jakość odczynników. Laboratoria patologii klinicznej minimalizują błędy testowania, pracując zgodnie z ustalonymi protokołami i programami szkoleniowymi, wykorzystując klinicznie zatwierdzone przeciwciała diagnostyczne, barwniki i odczynniki. W szczególności opracowanie wysoce specyficznych przeciwciał monoklonalnych do kluczowych markerów komórkowych doprowadziło do wykorzystania diagnostycznych paneli IHC w badaniach i klinicznej identyfikacji stanów chorobowych oraz wskazówek dla patologii chirurgicznej.

Diagnostyczna IHC i nowotwory

Większość nowotworów można zidentyfikować poprzez połączenie barwienia histologicznego i immunohistochemii diagnostycznej poprzez zlokalizowanie określonych antygenów w tkance biopsyjnej. Określenie dokładnego typu nowotworu przy użyciu standardowego barwienia H&E utrwalonych w formalinie tkanek może stanowić wyzwanie, szczególnie w przypadku guzów przerzutowych i/lub słabo zróżnicowanych. IHC zapewnia stosunkowo szybką i prostą metodę lepszego określenia pochodzenia tkanki nowotworowej i zbadania zachowania lub progresji danego nowotworu. Rak o nieznanym pochodzeniu pierwotnym (CUP) to stan, w którym obserwuje się przerzuty raka, ale pierwotne miejsce jest nieznane. Szacuje się, że spośród wszystkich nowotworów 3-5% przypadków zalicza się do CUP. W przypadku krytycznego CUP i innych nietypowych przypadków, w których nie ma zgodności w danych morfologicznych i klinicznych, IHC okazuje się ważna w zawężaniu zakresu alternatyw diagnostycznych. W niektórych przypadkach zapewnia znaczący wgląd w wstępną diagnozę dotyczącą fenotypu raka i miejsca guza pierwotnego. W IHC, immunobarwienie okazuje się być wygodnym narzędziem diagnostycznym do wykrywania wielu rodzajów nowotworów, w tym rak gruczołowy (jelita grubego, piersi, prostaty)oraz skóry.  Jest często stosowany w diagnostyce raka jelita grubego (HNPCC/zespół Lyncha) jako uzupełnienie klasycznych metod wykrywania, takich jak niestabilność mikrosatelitarna (MSI), która charakteryzuje się licznymi zmianami w typie powtarzalnego DNA. W patologii raka skóry identyfikacja melanocytów śródnaskórkowych w standardowych wycinkach barwionych metodą H&E jest zawodna, szczególnie w przypadku skóry uszkodzonej przez słońce. Nawet dokładna inspekcja może nie pomóc w wyraźnym odróżnieniu pigmentowanych keratynocytów od melanocytów lub wyraźnym określeniu gęstości melanocytów. Dlatego wielu patologów zaleca IHC w celu odróżnienia czerniaka in situ od jego naśladowców.

Diagnostyczna IHC i czynniki zakaźne

Diagnostyczna immunohistochemia zapewnia obecnie szybkie morfologiczne różnicowanie infekcji w próbkach tkanek od pacjentów, ułatwiając szybkie podejmowanie decyzji diagnostycznych w opiece nad pacjentem. Przeciwciała znakowane izotiocyjanianem fluoresceiny (FITC) zostały wykorzystane do wykrycia antygenów pneumokokowych w zakażonych tkankach. W wykrywaniu chorób zakaźnych IHC jest bardzo przydatna w identyfikacji mikroorganizmów, które są:

• trudne do wykrycia za pomocą rutynowych lub specjalnych barwień
• barwią się słabo
• występują w małych ilościach
• nie nadają się do hodowli

Niektóre diagnostyczne metody IHC są stosowane w przypadkach zapalenia wątroby typu B, zapalenia wątroby typu C, zakażeń wirusem cytomegalii w celu potwierdzenia czynników zakaźnych w tkankach przy użyciu specyficznych przeciwciał podniesionych przeciwko DNA lub RNA drobnoustrojów. Ponadto, IHC jest stosowana w wykrywaniu kilku infekcji skórnych w celu identyfikacji określonych infekcji wirusowych i bakteryjnych, które są trudne do wykrycia z pewnością przy użyciu rutynowych plam mikroskopowych. Test immunofluorescencji (IFA) był szeroko stosowany do wykrywania patogenów (wirusowych, bakteryjnych lub pierwotniakowych) w nieutrwalonych tkankach zarówno w medycynie ludzkiej, jak i weterynaryjnej.