Western Blotting
Western blotting to ugruntowana technika analityczna służąca do wykrywania, analizy i ilościowego oznaczania białek. Metoda ta jest szeroko stosowana do wykrywania określonych cząsteczek białek w złożonych próbkach, takich jak homogenaty tkankowe i lizaty komórkowe. Western blotting zazwyczaj obejmuje separację białek za pomocą elektroforezy żelowej, a następnie przeniesienie ich na membranę z polifluorku winylidenu (PVDF) lub nitrocelulozy. Po przeniesieniu białek można je wybarwić w celu wizualizacji i bezpośrednio zidentyfikować za pomocą sekwencjonowania N-końcowego, spektrometrii masowej lub immunodetekcji.
Nagrodzone kategorie
Wybieraj spośród różnych membran PVDF Immobilon®, aby uzyskać optymalną wydajność Western blotting i immunoblottingu białek w oparciu o rozmiar białka docelowego, zastosowanie, metodę wykrywania i wygodę.
Podnieś poziom badań w naukach przyrodniczych dzięki narzędziom do wykrywania białek opartym na enzymach. Zapoznaj się z naszą ofertą substratów i enzymów do testów ELISA, IHC, WB i innych.
Prefabrykowane poliakrylamidowe żele białkowe, bufory robocze i odczynniki do ręcznego wylewania żeli poliakrylamidowych do elektroforezy białek w żelach PAGE i SDS-PAGE.
W immunodetekcji Western blot białka są identyfikowane poprzez ich wiązanie ze specyficznymi przeciwciałami. Zazwyczaj przeciwciało pierwotne jest stosowane w połączeniu z przeciwciałem wtórnym sprzężonym z HRP lub AP do wykrywania chemiluminescencyjnego lub kolorymetrycznego przy użyciu odpowiedniego substratu. Alternatywnie, do bezpośredniej wizualizacji można użyć fluorescencyjnie znakowanego przeciwciała pierwotnego lub wtórnego.
Western blotting jest szeroko stosowany w biochemii do wykrywania obecności określonych białek, do określania zakresu modyfikacji potranslacyjnych, do weryfikacji ekspresji białek w zastosowaniach klonowania, do analizy poziomów ekspresji białek i biomarkerów, w mapowaniu epitopów przeciwciał oraz do testowania markerów chorób w warunkach klinicznych.
Potrzeba jednoczesnej analizy większej liczby białek w ograniczonych próbkach doprowadziła do ciągłych badań nad poprawą czułości i szybkości technik blottingu. Podwójne blotowanie eliminuje fałszywie pozytywne wyniki spowodowane niespecyficznymi interakcjami. Blotting daleko-zachodni umożliwia wykrywanie specyficznych interakcji białko-białko. Southwestern blotting służy do identyfikacji białek, które oddziałują z określonymi sekwencjami DNA. Multistrip blotting zwiększa przepustowość, jednocześnie minimalizując zmienność między blotami. Nowe technologie są opracowywane w celu zmniejszenia ilości białka wymaganego do wytworzenia sygnału i poprawy możliwości ilościowych Western blotting.
Przepływ pracy
Elektroforeza żelowa
Elektroforeza żelowa białek służy do oddzielania i rozdzielania białek przed blottingiem. Przygotowana mieszanina białek jest poddawana działaniu żelu poliakrylamidowego w celu sortowania białek według masy cząsteczkowej i ładunku.
Transfer do membrany
Białka rozdzielone na żelu w procesie elektroforezy są unieruchamiane poprzez przeniesienie na membranę PVDF lub nitrocelulozową. Transfer wykorzystuje prąd elektryczny do ściągnięcia białek z żelu na membranę (elektroblotting).
Wykrywanie
Białko docelowe jest wykrywane przy użyciu przeciwciała pierwszorzędowego w połączeniu z przeciwciałem drugorzędowym sprzężonym z HRP lub AP i odpowiednim substratem chemiluminescencyjnym lub kolorymetrycznym, lub przy użyciu fluorescencyjnie znakowanego przeciwciała pierwszorzędowego lub drugorzędowego.
Odwiedź naszą wyszukiwarkę dokumentów, aby znaleźć arkusze danych, certyfikaty i dokumentację techniczną.
Powiązane artykuły
- Explore the basics of working with antibodies including technical information on structure, classes, and normal immunoglobulin ranges.
- Oferujemy szeroką gamę enzymów fosfatazy alkalicznej i substratów, które są zoptymalizowane pod kątem koniugacji z przeciwciałami i innymi białkami dla konkretnych potrzeb aplikacyjnych.
- Kontrole ładowania w aplikacji western blotting.
- Gelatin is a heterogeneous mixture of water-soluble proteins extracted by boiling skin, tendons, ligaments, bones, etc. in the water.
- Rozwiązywanie problemów z transferem białek w Western blotting poprzez zrozumienie przyczyn i optymalizację warunków transferu.
- Zobacz wszystkie (44)
Powiązane protokoły
- Protokół przygotowania próbki do lizy komórek i wydajnej ekstrakcji białek z hodowanych tkanek i komórek do późniejszego Western blottingu.
- Protokół Western blot szczegółowo opisuje przenoszenie białek z żeli na nitrocelulozę, co ma kluczowe znaczenie dla procedur immunoblottingu w badaniach naukowych.
- BCIP/NBT substrate produces stable, intense color for alkaline phosphatase assays, ideal for visual observation.
- This page describes chemiluminescence detection of GST-tagged proteins with Amersham ECL, Amersham ECL Prime, and Amersham ECL Select from Cytiva.
- The SNAP i.d. 2.0 Protein Detection System is the second generation of the SNAP i.d. method for detecting immunoreactive proteins on Western blots.
- Zobacz wszystkie (21)
Znajdź więcej artykułów i protokołów
Jak możemy pomóc
W przypadku jakichkolwiek pytań, prosimy o przesłanie prośby o wsparcie klienta
lub rozmowę z naszym zespołem obsługi klienta:
Email custserv@sial.com
lub zadzwoń +1 (800) 244-1173
Dodatkowe wsparcie
- Chromatogram Search
Use the Chromatogram Search to identify unknown compounds in your sample.
- Kalkulatory i aplikacje
Web Toolbox - narzędzia naukowe i zasoby dla chemii analitycznej, nauk przyrodniczych, syntezy chemicznej i materiałoznawstwa.
- Customer Support Request
Obsługa klienta, w tym pomoc przy zamówieniach, produktach, kontach i kwestiach technicznych związanych z witryną.
- FAQ
Explore our Frequently Asked Questions for answers to commonly asked questions about our products and services.
Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.
Nie masz konta użytkownika?