HPLC małych cząsteczek
Analiza małych cząsteczek
Mała cząsteczka odnosi się do związku o niskiej masie cząsteczkowej (zazwyczaj poniżej 900 daltonów). Niektóre typowe przykłady małych cząsteczek obejmują aminokwasy, lipidy, cukry, kwasy tłuszczowe, alkaloidy i inne.
Dostępne są różne metody separacji małych cząsteczek, w tym Wysokosprawna chromatografia cieczowa (HPLC), chromatografia cieczowa (LC), chromatografia gazowa (GC), chromatografia cienkowarstwowa (TLC) i elektroforeza kapilarna (CE). Ponadto, opcje ich identyfikacji obejmują spektroskopię magnetycznego rezonansu jądrowego (NMR) lub spektrometrię mas (MS). Chromatografia cieczowa sprzężona ze spektrometrią mas (LC-MS) stała się kluczową techniką identyfikacji małych cząsteczek w ostatnich latach.
Uzyskanie najlepszych możliwych wyników w analizie małych cząsteczek metodą wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC), UHPLC lub LC-MS zależy od wyboru najlepszej odpowiedniej fazy stacjonarnej i warunków fazy ruchomej. Skład chemiczny analitu ma kluczowe znaczenie dla wyboru najlepszego składu chemicznego kolumny. Inne aspekty, takie jak prędkość, matryca próbki i liczba związków określają najlepszy materiał bazowy dla fazy stacjonarnej.
Wyszukaj chromatogramy
.Powiązane artykuły techniczne
- Kolumny Chromolith® HPLC i UHPLC są wykonane z monolitycznej krzemionki o bimodalnej strukturze porów przy użyciu technologii zol-żel.
- Przegląd wpływu czynników wydajności (liczby płytek), retencji i selektywności na rozdzielczość HPLC. Zobacz, jak czynniki odnoszą się do charakterystyki cząstek i kolumny za pomocą równania rozdzielczości HPLC.
- Kolumny Supel™ Carbon LC U/HPLC ułatwiają separację w wysokiej temperaturze i pod wysokim ciśnieniem związków polarnych lub naładowanych.
- Wskazówki dotyczące optymalizacji czułości LC-MS minimalizują zanieczyszczenia, zwiększając limity wykrywania i przejrzystość widma w celu dokładnej analizy.
- Badanie to pokazuje wpływ różnych modyfikatorów fazy ruchomej na separację; modyfikatory mrówczanu przewyższają octan pod względem sygnałów MS (lub czułości) i rozdzielczości chromatograficznej.
- Zobacz wszystkie (175)
Powiązane protokoły
- Separacja HPLC 17 ważnych kannabinoidów, w tym CBD, delta 9 THC i THCA. Przeczytaj notę aplikacyjną.
- Kompletny przepływ pracy do kompleksowej analizy terpenów w konopiach indyjskich
- Analiza aminokwasów jest odpowiednim narzędziem do precyzyjnego określania ilości białka, ale także dostarcza szczegółowych informacji na temat względnych aminokwasów.
- Metoda GB z kolumną Ascentis® Express C30 osiąga podstawową rozdzielczość dla krytycznej pary witamin A i E.
- Analiza HPLC-UV związków aktywnych w produktach spożywczych zawierających marihuanę do testowania mocy; złożona matryca wymaga precyzyjnych metod.
- Zobacz wszystkie (102)
Znajdź więcej artykułów i protokołów
HPLC małych cząsteczek
Analiza HPLC małych cząsteczek jest najczęściej wykonywana w trybie separacji w fazie odwróconej. Do rozdzielania związków polarnych odpowiednie są również chromatografia oddziaływań hydrofilowych (HILIC) i chromatografia w fazie normalnej, przy czym preferowaną metodą jest HILIC. Do separacji związków jonowych można również zastosować tryby separacji jonowymiennej, a w przypadku anionów lub kationów nieorganicznych chromatografię jonową.
Kolumna HPLC jest wypełniona w pełni porowatymi cząstkami krzemionki, powierzchniowo porowatymi cząstkami krzemionki, cząstkami polimerowymi lub składa się z monolityczna krzemionka jako faza stacjonarna. Ponadto stosuje się tlenek glinu, cząstki cyrkonu i cząstki węgla. Typowy rozmiar porów materiału fazy stacjonarnej do separacji małych cząsteczek mieści się w zakresie 60 Å - 160 Å. W przypadku HPLC typowy rozmiar cząstek fazy stacjonarnej wynosi od 3 µm do 5 µm, w przypadku UHPLC stosuje się mniejsze rozmiary cząstek, zwykle 2 µm lub mniejsze. Do fazy stacjonarnej można dołączyć różne selektywności kolumn (modyfikacje). Łańcuch alkilowy C18 jest najczęściej stosowaną chemią kolumny w chromatografii z odwróconą fazą (RP). Niemniej jednak, inne modyfikacje, takie jak C30, C8, Phenyl, Pentaflourophenyl i szeroka gama bardziej polarnych modyfikacji, jak również modyfikacje o właściwościach jonowymiennych lub chiralnych umożliwiają rozdzielanie prawie wszystkich związków rozpuszczalnych w cieczach. Faza ruchoma dla RP-HPLC zazwyczaj składa się z buforu wodnego lub wody i mieszających się z wodą rozpuszczalników organicznych, takich jak acetonitryl lub metanol.
Przygotowanie próbek HPLC
Próbki złożone i bogate w matrycę, takie jak żywność, napoje, kosmetyki, próbki biologiczne i preparaty farmaceutyczne bogate w matrycę (np. śmietana, syrop) wymagają skutecznych protokołów przygotowania próbek w celu usunięcia niepożądanych składników i selektywnej ekstrakcji interesującego analitu. Ma to krytyczne znaczenie w przypadku stosowania fazy stacjonarnej o bardzo małych rozmiarach cząstek, jak w UHPLC, gdzie stosowane są cząstki o wielkości 2 µm lub mniejsze. Typowe metody przygotowania próbek to ekstrakcja ciecz-ciecz, ekstrakcja do fazy stałej (SPE), a w przypadku próbek biologicznych także wytrącanie białek oprócz filtracji. Oprócz selektywnej elucji związku docelowego i wstępnego zatężania, głównym celem przygotowania próbki jest ochrona fazy stacjonarnej HPLC przed zatykaniem spowodowanym przez matrycę próbki. Kolumny HPLC oparte na monolityczna krzemionka może w dużym stopniu tolerować matrycę i wymaga znacznie mniejszego przygotowania próbki niż kolumny cząsteczkowe.
Derywatyzacja
Dla niektórych cząsteczek wymagana jest derywatyzacja, przed (przed kolumną) lub po (po kolumnie) separacji HPLC. Derywatyzacja przekształca cząsteczki w ich pochodne w celu uzyskania lepszej czułości lub retencji chromatograficznej w HPLC. Do wymaganej derywatyzacji stosuje się odczynniki chemiczne o pożądanych właściwościach fizycznych i chemicznych.
Najważniejsze wydarzenia
Oblicz oszczędność czasu pracy i zużycia rozpuszczalnika podczas przenoszenia metody z HPLC do UHPLC.
Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.
Nie masz konta użytkownika?