Ilościowe oznaczanie białek

Testy absorbancji UV

Użycie absorbancji ultrafioletowej (UV) do pomiaru stężenia białka jest stosunkowo prostym testem ilościowym białka. Aminokwasy z aromatycznymi łańcuchami bocznymi (tryptofan, tyrozyna itp.) zapewniają białkom charakterystyczną absorbancję UV przy 280 nm. Ponieważ te aminokwasy absorbują światło UV przy 280 nm, absorbancję przy tej konkretnej długości fali można uzyskać za pomocą spektrofotometru i wykorzystać do oszacowania stężenia białka w próbkach. Ten stosunkowo szybki test jest często stosowany w laboratoriach, a metoda Warburga-Christiana jest zwykle wykonywana w celu oszacowania stężenia białka. Jednak wykorzystanie absorbancji UV do oznaczania stężenia białka może charakteryzować się dużą zmiennością, ponieważ składniki niebiałkowe w próbce mogą zakłócać pomiary absorbancji. Dodatkowo, mieszaniny z różnymi białkami w próbce mogą powodować różne odczyty absorbancji ze względu na różnicę w składzie aminokwasów.

Testy oparte na odczynnikach

Testy oparte na odczynnikach przezwyciężają problemy związane z kompatybilnością, które obserwuje się w przypadku metod absorbancji UV. Przykłady testów opartych na odczynnikach do ilościowego oznaczania białek obejmują te, które wykorzystują metody kolorymetryczne, takie jak kwas bicinchoninowy (BCA), Lowry i testy Bradforda. Metoda metoda BCA i metoda Lowry'ego obejmują tworzenie kompleksu miedź-białko. Są to czułe testy i są mniej zmienne niż test Bradforda. Jednak test Bradforda jest szybki, łatwy do wykonania i jest kompatybilny z niektórymi czynnikami redukującymi, w przeciwieństwie do testów BCA i Lowry'ego.

Testy immunologiczne

Niektóre testy mogą nie być w stanie zapewnić dokładnego oznaczenia ilościowego białek, jeśli w próbce znajduje się wiele białek lub ich ilości są poniżej progu wykrywalności. Potężne technologie testów immunologicznych, wykorzystujące różne metody wykrywania, zapewniają alternatywną metodę precyzyjnego oznaczania ilościowego białek z różnych rodzajów próbek. Na przykład, testy multipleksowe pozwalają badaczom na ilościowe oznaczanie wielu białek w próbce jednocześnie. Ponadto technologia zliczania pojedynczych cząsteczek może mierzyć femtogramowe poziomy białek, aby pomóc w identyfikacji i kwantyfikacji białek o niskim poziomie w małych próbkach. Zastosowania badawcze wykorzystujące te technologie obejmują pomiar biomarkerów w zdrowych tkankach lub tych związanych z postępem choroby w celu lepszego zrozumienia niektórych stanów chorobowych.