Oczyszczanie próbek
Różne chemiczne i fizyczne metody oczyszczania mogą być stosowane w celu oddzielenia lub zagęszczenia docelowego analitu przed analizą. Wśród nich są absorpcja, adsorpcja, chromatografia, destylacja, ekstrakcja, wymiana jonowa, filtracja, tworzenie kompleksów, krystalizacja, suszenie i wiele innych. Przygotowanie próbki przed analizą pomaga doprowadzić próbkę do formatu zgodnego z techniką analityczną, zmniejsza złożoność próbki, usuwa zakłócające zanieczyszczenia i koncentruje analit przed analizą. Odpowiednie przygotowanie próbki zapobiega zatykaniu, może zmniejszyć potrzebę rygorystycznych procedur płukania i może wydłużyć żywotność medium chromatograficznego.
Powiązane artykuły techniczne
- Mówi się, że substancje są ze sobą mieszalne, jeśli rozpuszczają się, tworząc jednolity roztwór. Dodaj do zakładek lub pobierz naszą tabelę mieszalności dla popularnych rozpuszczalników laboratoryjnych.
- Jak oddzielić białka i peptydy z afiliacją do jonów metali za pomocą immobilizowanej chromatografii z afiliacją chelatów metali.
- This page shows volatile and non-volatile buffer suggestions for anion and cation exchange chromatography.
- Chromatografia jonowymienna jest stosowana w zestawach Genopure Plasmid Midi Kit i Genopure Plasmid Maxi Kit.
- Często zadawane pytania dotyczące chromatografii spiralnej
- Zobacz wszystkie (39)
Powiązane protokoły
- Ta strona pokazuje, jak konwertować między przepływem liniowym a przepływem objętościowym w chromatografii powinowactwa.
- Separation using Sephadex LH-20 column for Size Exclusion Chromatography media in polysaccharide network from Cytiva.
- In this section the practical aspect of Reverse Phased Chromatography ( RPC) is discussed including media and column selection and eluent selection and preparation.
- Superose from Cytiva are Size Exclusion Chromatography media consisting of a composite base matrix of dextran and agarose. This page shows how to perform a separation with a superose column.
- Żywica Amberlite™ XAD-4 skutecznie usuwa detergenty z pożywek do hodowli komórkowych, co ma kluczowe znaczenie dla produkcji szczepionek.
- Zobacz wszystkie (62)
Znajdź więcej artykułów i protokołów
Następujące najczęściej stosowane techniki oczyszczania są wykorzystywane w laboratorium do przygotowania próbek do dalszej analizy.
Dializa
Dializa jest techniką oczyszczania stosowaną do usuwania soli lub innych cząsteczek o niskiej masie cząsteczkowej z próbki. Służy również do wymiany składu buforowego próbki. Dializa jest techniką pasywną wymagającą dużych objętości buforu.
Wymiana buforu i odsalanie
Desalanie jest prostą metodą usuwania soli i innych zanieczyszczeń o niskiej masie cząsteczkowej z próbki. Służy również do wymiany buforu przed lub po różnych etapach chromatografii oraz do szybkiego usuwania odczynników w celu zakończenia reakcji.
Frakcjonowane wytrącanie
Frakcjonowane wytrącanie służy do usuwania dużych zanieczyszczeń z małych objętości próbek. Techniki strącania oddzielają frakcje zgodnie z zasadą zróżnicowanej rozpuszczalności. Ponieważ gatunki białek różnią się stopniem hydrofobowości, zwiększone stężenie soli może wzmocnić interakcje hydrofobowe między białkami i spowodować wytrącanie.
Ekstrakcja
Przygotowanie próbki przez ekstrakcję obejmuje izolację docelowych analitów ze złożonej próbki lub znacznie większej objętości próbki. Proces ten usuwa zakłócające składniki próbki, które mogą blokować kolumny HPLC i GC. Zwiększa również stężenie analitu o współczynnik od 100 do 5000, tym samym znacznie poprawiając czułość wykrywania. Jako część selektywnego i specyficznego przygotowania próbki, ekstrakcja pomaga zapewnić bardziej wiarygodną analizę chromatograficzną. Rodzaje ekstrakcji to ekstrakcja ciecz-ciecz, ekstrakcja do fazy stałej (SPE), oraz mikroekstrakcja do fazy stałej (SPME).
Chromatografia powinowactwa
Chromatografia powinowactwa oddziela białka w oparciu o odwracalne interakcje między białkiem a określonym ligandem, który został sprzężony z matrycą chromatograficzną. Technika ta jest wysoce selektywna i pozwala na oczyszczanie białek o wysokiej wydajności. Chromatografia powinowactwa może być stosowana zawsze, gdy dostępny jest odpowiedni ligand dla białka będącego przedmiotem zainteresowania.
Puryfikacja za pomocą chromatografii powinowactwa obejmuje etapy wychwytywania i elucji. W fazie wychwytywania białko docelowe jest specyficznie i odwracalnie wiązane z komplementarnym ligandem, który został unieruchomiony na matrycy chromatograficznej. Celem jest izolacja, koncentracja i stabilizacja produktu docelowego, zachowując jego moc i aktywność. Po przemyciu matrycy w celu usunięcia niezwiązanego materiału, związane białko docelowe jest odzyskiwane poprzez zmianę warunków na sprzyjające elucji. Elucja jest przeprowadzana specyficznie, przy użyciu konkurencyjnego ligandu lub niespecyficznie, poprzez zmianę pH, siły jonowej lub polarności. Elucja umożliwia pobranie białka docelowego w oczyszczonej i skoncentrowanej formie.
Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.
Nie masz konta użytkownika?