Zestawy do izolacji komórek

Chociaż badanie komórek pochodzących z tkanek in vivo jest najbardziej predykcyjne dla biologii i funkcji komórek, złożoność biologiczna może mylić wyniki, chyba że docelowe populacje komórek są izolowane. W celu zbadania fenotypów komórek, wyewoluowały różne metody izolowania populacji komórek w oparciu o ostateczne cechy. Izolowanie populacji komórek nie tylko pomaga w badaniach biologicznych, ale także ułatwia kliniczne testy diagnostyczne. Najskuteczniejsze metody izolacji wykazują zwiększoną wydajność, czystość i żywotność. Wzbogacanie lub oczyszczanie populacji docelowych można osiągnąć poprzez selekcję pozytywną─często z wykorzystaniem przeciwciał, które wiążą markery specyficzne dla komórek─lub poprzez selekcję negatywną, która może wykorzystywać właściwości biofizyczne do usuwania niechcianych komórek w celu wzbogacenia populacji docelowej.  

Frakcjonowanie komórek na ich subkomórkowe składniki od dawna ma fundamentalne znaczenie dla badań biologii komórki. Techniki frakcjonowania subkomórkowego są szeroko stosowane do badania struktury i funkcji organelli i przedziałów subkomórkowych, a także do zrozumienia lokalizacji, przetwarzania i transportu biomolekuł. Celem większości technik frakcjonowania jest uzyskanie organelli i makrocząsteczek komórkowych w stanie funkcjonalnym, w którym zachowują one swoje wewnętrzne właściwości biochemiczne. Jest to często osiągane poprzez lizę komórek przy użyciu delikatnych środków mechanicznych lub łagodnych detergentów, po której często następuje frakcjonowanie składników komórkowych poprzez wirowanie różnicowe.

Izolacja komórek według fenotypu

Preadipocyty mogą być wykorzystywane do badania procesu adipogenezy, a po zróżnicowaniu do oceny lipolizy, sygnalizacji komórkowej, funkcji hormonalnej i aktywności metabolicznej.

Nasz Zestaw do izolacji preadipocytów łączy w sobie narzędzia i odczynniki potrzebne do izolacji frakcji komórek zrębu naczyniowego z tkanki tłuszczowej. Uzyskana frakcja zrębu naczyniowego jest hodowana na płytce do hodowli tkankowej, gdzie przylegają preadipocyty. Preadipocyty zachowują zdolność do proliferacji i różnicowania się w adipocyty, gdy są traktowane składnikami indukującymi różnicowanie.

Izolacja organelli i kompleksów subkomórkowych

Derywacja składników subkomórkowych promuje zrozumienie funkcji organelli i może prowadzić do nowych biotechnologii. Na przykład, jądra wyizolowane z komórek ssaków mogą być następnie wykorzystane do syntezy endogennych transkryptów pierwotnych RNA. Wysokowydajny zestaw Nuclei EZ Prep Kit (NUC101, NUC201) został opracowany do szybkiej izolacji jąder z większości komórek ssaków.

Do wykrywania integralności mitochondriów i potencjału błonowego, nasz zestaw do barwienia mitochondriów (CS0390, CS0760) wykorzystuje barwnik JC-1 (420200, T4069), który koncentruje się w macierzy mitochondrialnej, tworząc czerwone fluorescencyjne agregaty. Zdarzenia takie jak apoptoza, które rozpraszają potencjał błony mitochondrialnej, zapobiegają gromadzeniu się barwnika JC-1 w mitochondriach, a mikroskop fluorescencyjny może być następnie użyty do odróżnienia mitochondriów żywych od uszkodzonych.

Nieorganellowe kompleksy subkomórkowe, takie jak proteasomy, mogą być również izolowane do użytku w testach proteolitycznych. Nasza metoda wykorzystuje kulki macierzy powinowactwa zawierające białko fuzyjne GST z domeną podobną do ubikwityny związaną z GST-agarozą.

Wzbogacanie cytoszkieletu

Praca z białkami, które łączą się z cytoszkieletem aktyny, tradycyjnie stanowiła wyzwanie ze względu na nierozpuszczalność elementów cytoszkieletu w detergentach, takich jak Triton X-100.Zestaw Millipore ProteoExtract^® Cytoskeleton Enrichment and Isolation Kit dostarcza bufory do oczyszczania cytoszkieletu, które zachowują ogniskową adhezję i białka związane z aktyną, jednocześnie usuwając z komórki rozpuszczalne białka cytoplazmatyczne i jądrowe. Takie podejście zwiększa zdolność do wykrywania i badania białek związanych z aktyną o niskiej liczebności, które są często maskowane w metodach Western blot do analizy lizatów całych komórek.