Przygotowanie mediów

Przygotowanie pożywek

Komercyjne pożywki hodowlane są dostarczane w postaci odwodnionej lub sproszkowanej, w postaci płynnego koncentratu lub jako roztwory robocze. Odwodnione pożywki do hodowli bulionowych należy przygotować poprzez rozpuszczenie w wodzie destylowanej i dostosowanie końcowego pH przed sterylizacją. Sproszkowane pożywki do hodowli agarowych należy rozpuścić w wodzie destylowanej, wymieszać, a następnie zagotować lub autoklawować przed przelaniem do sterylnych szalek Petriego przy użyciu technik aseptycznych. Podłoża hodowlane dostarczane jako płynne koncentraty muszą być aseptycznie rozcieńczone w wodzie destylowanej, dostosowane pod względem pH i dozowane do sterylnych pojemników w celu przechowywania. Podłoża hodowlane dostarczane jako roztwory robocze są gotowe do użycia po dodaniu wymaganej surowicy lub innych suplementów w warunkach sterylnej filtracji i/lub aseptycznych oraz ogrzaniu do odpowiedniej temperatury dla wzrostu komórek.

Sterylizacja podłoża hodowlanego

Podłoża hodowlane przygotowane z proszków muszą być sterylizowane przez filtrację, ogrzewanie lub autoklawowanie przed użyciem. Chociaż płynne pożywki są często dostarczane sterylne i w stężeniu gotowym do użycia, zaleca się sterylną filtrację, szczególnie jeśli przed użyciem mają zostać dodane surowice lub inne suplementy.

Suplementy pożywek hodowlanych

Niektóre suplementy wymagane do hodowli komórek lub regulacji są niestabilne lub nietrwałe termicznie; dlatego muszą być dodane przez użytkownika do sterylizowanego termicznie podstawowego podłoża hodowlanego przed użyciem. Surowica zwykle pochodząca ze źródeł bydlęcych (FBS) jest powszechnym suplementem stosowanym w pożywkach do hodowli komórek zwierzęcych. Hormony, czynniki wzrostu i specyficzne cząsteczki sygnalizacyjne mogą być wymagane do wzrostu niektórych typów komórek. Dodatki takie jak IPTG są używane do indukowania ekspresji białek. Antybiotyki mogą być również dodawane do pożywek hodowlanych w celu kontrolowania wzrostu zanieczyszczeń bakteryjnych i grzybiczych, chociaż zanieczyszczenie może być dobrze kontrolowane dzięki odpowiedniej obsłudze i przechowywaniu pożywek.

Przechowywanie i stosowanie podłoży hodowlanych

Komercyjne i gotowe podłoża hodowlane w postaci płynnej, wylanego agaru lub roztworów roboczych są zwykle przechowywane w temperaturze 4 °C w ciemności, aby powstrzymać wzrost mikroorganizmów oportunistycznych i zapobiec degradacji składników podłoża hodowlanego pod wpływem światła. Przed zaszczepieniem kulturami, pożywki należy ogrzać do odpowiedniej temperatury dla wzrostu komórek.