Przygotowanie próbki przez filtrację
Filtracja to technika separacji stosowana do zagęszczania lub oczyszczania substancji w oparciu o ich właściwości fizyczne lub chemiczne. Jest to prosta i rutynowa metoda stosowana w wielu laboratoriach do usuwania nierozpuszczalnych cząstek z roztworów i przygotowywania próbek do analizy. Filtracja jest stosowana w celu zmniejszenia złożoności próbki, poprawy przejrzystości lepkich próbek i zmniejszenia sygnałów tła, co skutkuje zwiększeniem stosunku sygnału do szumu w testach analitycznych.
W zależności od zastosowanej metody filtracji, cząsteczki lub molekuły są oddzielane na podstawie właściwości takich jak rozmiar, kształt lub ładunek. Ciecz, która przechodzi przez filtr nazywana jest "filtratem", a zebrany lub zatrzymany materiał to "retentat" lub "pozostałość".
- Odwrócona osmoza (separacja jonowa) oddziela jony lub cząsteczki za pomocą półprzepuszczalnej membrany lub bariery. Zastosowane ciśnienie pokonuje ciśnienie osmotyczne i zmusza rozpuszczalnik do przemieszczania się z wysokiego stężenia substancji rozpuszczonej do niskiego stężenia substancji rozpuszczonej. Odwrócona osmoza odrzuca wysoki procent materii organicznej innej niż cząstki stałe i 99% soli. Typowa ocena membrany opiera się na retencji chlorku sodu (<0,001 µm, <100 Daltonów)
- Ultrafiltracja (separacja makrocząsteczek) oddziela cząsteczki i rozpuszczone cząsteczki z płynów na podstawie wielkości cząsteczek. Ultrafiltracja jest stosowana do zatężania, frakcjonowania, odsalania i wymiany buforów. Typową wartością jest nominalny limit masy cząsteczkowej (NMWL) pomiędzy 1-1000 kDa.
- Filtracja mikroporowata (mikrofiltracja) jest stosowana do zatrzymywania/wykluczania cząstek i sterylizacji, ponieważ oddziela/usuwa cząstki i jednostki biologiczne, takie jak bakterie i komórki, na podstawie wielkości cząstek. Rozmiary porów wynoszą zazwyczaj od 0,025 do 10 µm i są oceniane jako nominalne (~98% retencji) lub absolutne (100% retencji wielkości równej wielkości porów).
- Filtry klarujące są używane do filtracji wstępnej i analizy cząstek, ponieważ zatrzymują/usuwają duże cząstki, agregaty i zanieczyszczenia w oparciu o rozmiar. Mogą być stosowane jako podstawowy etap filtracji przed mikrofiltracją. Filtry klarujące mają zazwyczaj wielkość porów wynoszącą 5 µm. zatrzymywane.
Powiązane artykuły techniczne
- Syringe filter selection guide for HPLC, UHPLC, and Ion Chromatography using pore size, filter diameter, chemical compatibility, analyte binding, and extractables.
- Metody filtracji i wybór filtrów membranowych w oczyszczaniu i produkcji nanocząstek.
- Hydrophilic PTFE Millex® syringe filters ensure accurate dissolution testing and sample preparation for HPLC analysis.
- Ultrafiltration using Amicon® Ultra centrifugal devices for concentrating virus in preparation of high titer virus stocks and isolation of virus from samples.
- Syringe membrane filter selection and validation methods to assess analyte loss due to membrane filter adsorption in pharmaceutical quality control (QC) testing.
- Zobacz wszystkie (22)
Powiązane protokoły
- Do analizy kofeiny w kawie wykorzystano HPTLC. Jedynym sposobem przygotowania próbki była filtracja kawy przez filtr strzykawkowy PTFE. Kwantyfikacja została przeprowadzona za pomocą skanera TLC.
- Protokoły oczyszczania immunoglobulin zasadniczo obejmują wiązanie powinowactwa do podłoża chromatograficznego z białkiem A lub G, przemywanie niezwiązanych białek i elucję buforem o niskim pH.
- HPLC Analysis of Polyphenols in Nero d'Avola Red Wine on Discovery® HS C18 (UV 280 nm)
- Millicup™-FLEX disposable vacuum filter was designed to reduce contamination and save time. The solvent-resistant unit allows for filtration into storage bottles.
- Samplicity® G2 filtration system enhances HPLC workflow; watch video tutorials and application notes for effective sample preparation.
- Zobacz wszystkie (12)
Znajdź więcej artykułów i protokołów
Commonous Filtration Applications
- Ogólne usuwanie cząstek stałych
- Przygotowanie próbek do technik analitycznych, takich jak HPLC, UHPLC, chromatografia jonowa, chromatografia gazowa i testy rozpuszczania
- Sterylizacja dodatków do hodowli komórkowych
- Stężenie białek, kwasów nukleinowych i polimerów
- Rozdzielanie biomolekuł w próbce
- Przygotowanie buforów<
- Oczyszczanie wody
Filtracja jest niezbędnym etapem przygotowania próbki przed wrażliwą analizą chromatograficzną, taką jak HPLC i LC-MS. Cząstki stałe w próbkach mogą zakłócać analizy chromatografii cieczowej, gazowej i jonowej poprzez zatykanie kolumn lub głowic kolumn, lub poprzez generowanie pików zanieczyszczeń ("pików duchów") na chromatogramach. Właściwa filtracja próbek, rozpuszczalników i buforów zapewnia wyższą jakość i spójność wyników analitycznych.
Types of Filtration Processes & Procedures
Istnieje wiele filtrów o różnym składzie mediów filtracyjnych, z których każdy jest przeznaczony do określonych zastosowań. Wybór filtra zależy od kilku czynników, w tym
- Rozmiar cząstek lub molekuł, które mają być wykluczone lub włączone
- Skład chemiczny próbki
- Kompatybilność mediów filtracyjnych z próbką lub roztworem
- lepkość próbki
Filtry mogą być wykonane z różnych rodzajów materiałów, takich jak papier, tkanina, wełna bawełniana, azbest, żużel lub wełna szklana, nieszkliwione wyroby ceramiczne, piasek lub inny porowaty materiał. Filtry membranowe są zwykle wykonane z syntetycznych polimerów (np. hydrofilizowanego PTFE, PVDF, nylonu, PES).
Do napędzania procesu filtracji można zastosować różne siły. Filtracja może być napędzana zwykłą grawitacją przy użyciu filtra i lejka, ręcznie, jak w przypadku filtracji strzykawkowej, lub siłą odśrodkową. W przypadku filtracji próżniowej, pompa próżniowa jest używana do szybkiego przeciągania płynu przez filtr.
Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.
Nie masz konta użytkownika?