04-790

Przeciwciało anty-dimetylo-histonowe H3 (Lys4), klon AW30, królicze monoklonalne

culture supernatant, clone AW30, Upstate^®

• Synonim(y): H3K4me2, histon H3 (di metyl K4)
• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.41
• eCl@ss: 32160702
• Clone: AW30, monoclonal
• Species reactivity: chicken, human
• Application: ChIP, DB, WB, inhibition assay
• Citations: 12

Właściwości

• biological source: rabbit
• Quality Level: 100
• antibody form: culture supernatant
• antibody product type: primary antibodies
• clone: AW30, monoclonal
• species reactivity: chicken, human
• manufacturer/tradename: Upstate^®
• technique(s): ChIP: suitable (ChIP-seq), dot blot: suitable, inhibition assay: suitable (peptide), western blot: suitable
• isotype: IgG
• NCBI accession no.: NM_003493
• UniProt accession no.: Q16695
• shipped in: dry ice
• target post-translational modification: dimethylation (Lys4)
• Gene Information: human ... H3C1(8350)

Opis

General description

Histony to wysoce konserwatywne białka, które służą jako rusztowanie strukturalne dla organizacji jądrowego DNA w chromatynę. Cztery podstawowe histony, H2A, H2B, H3 i H4, łączą się w oktamer (po 2 cząsteczki każdego z nich). Następnie 146 par zasad DNA owija się wokół oktameru, tworząc nukleosom, podstawową podjednostkę chromatyny. Histony są modyfikowane potranslacyjnie przez działanie enzymów zarówno w jądrze, jak i cytoplazmie. Modyfikacje te regulują transkrypcję, naprawę, rekombinację i replikację DNA. Najczęściej badanymi modyfikacjami są acetylacja, fosforylacja, metylacja i ubikwitynacja. Modyfikacje te zachodzą głównie na N-końcowych i C-końcowych ogonach, które rozciągają się poza cząsteczkę rdzenia nukleosomu. Di- i trimetylacja histonu H3 przy Lys4 koreluje z aktywnością transkrypcyjną wielu genów. Dimetylacja histonu H3 w Lys4 występuje zarówno w aktywnych, jak i nieaktywnych regionach euchromatycznych, ale nie w cichych miejscach heterochromatycznych, podczas gdy trimetylacja w Lys4 występuje wyłącznie w aktywnych genach.

~17kDa

Immunogen

Syntetyczny peptyd sprzężony z KLH zawierający sekwencję ...Tme2KQT..., w której me2K odpowiada dimetylo-lizynie w reszcie 4 ludzkiego histonu H3.

Application

Analiza Western Blot:
Rozcieńczenie 1:1000-1:2000 tej partii wykryło dimetyl histonu H3 (Lys4) w ekstraktach kwasu HeLa.

Analiza Western Blot:
Rozcieńczenie 1:2,000 do 1:10,000 poprzedniej partii wykryło metylowany histon H3 w białkach ekstrahowanych kwasem z komórek HeLa. Przeciwciało nie wykryło niemetylowanego rekombinowanego histonu H3.

Analiza ChIP-seq:
Reprezentatywne dane partii. Immunoprecypitację chromatyny przeprowadzono przy użyciu zestawu Magna ChIP HiSens (nr kat. 17-10460), przeciwciała przeciw dimetylowi-histonowi H3 (Lys4) (2 µl nr kat. 04-790), 20 µl kulek Protein A/G i 1e6 usieciowanej chromatyny komórek HeLa, a następnie oczyszczono DNA za pomocą kulek magnetycznych. Biblioteki zostały przygotowane z próbek Input i ChIP DNA przy użyciu standardowych protokołów z adapterami Illumina z kodem kreskowym i analizowane na instrumencie Illumina HiSeq. Ponad szesnaście milionów odczytów z plików FastQ zmapowano za pomocą Bowtie (http://bowtie-bio.sourceforge.net/manual.shtml) po usunięciu tagów TagDust (http://genome.gsc.riken.jp/osc/english/dataresource/). Piki zostały zidentyfikowane przy użyciu MACS (http://luelab.dfci.harvard.edu/MACS/), z pikami i odczytami wizualizowanymi jako niestandardowa ścieżka w UCSC Genome Browser (http://genome.ucsc.edu) z plików BigWig i BED. Najwyższe 25% pików zidentyfikowanych w zbiorach danych 04-790 i 05-1338 wykazało 92 i 90% pokrywania się z pikami zidentyfikowanymi w ścieżce ENCODE H3K4me2 BROAD Histone dla HeLa S3.

Analiza Dot Blot:
Absurance Histone H3 Antibody Specificity Array (nr kat. 16-667) i Absurance Histone H2A, H2B, H4 Antibody Specificity Array (nr kat. 16-665), które zawierają peptydy histonowe z różnymi modyfikacjami, były sondowane z Cat. 04-790, Anti-dimethyl Histone H3 (Lys4), klon AW30 w rozcieńczeniu 1:1000. Białka były wizualizowane przy użyciu IgG Osioł anty-Rabbit sprzężonej z HRP i systemu detekcji chemiluminescencji.

Analiza inhibicji peptydowej:
2 μM peptydu histonu H3 zawierającego dimetylo-lizynę 4 zniosło wykrywanie histonu H3 przez poprzednią partię przeciwciał w analizie immunoblot ekstraktów kwasu HeLa. Nie zaobserwowano redukcji sygnału w przypadku peptydów histonu H3 zawierających modyfikacje monometylo- lub trimetylo-lizyny 4

Kategoria badawcza
Epigenetyka i funkcje jądrowe

Podkategoria badawcza
Histony

Przeciwciało anty-dimetylo-Histone H3 (Lys4), klon AW30 jest króliczym przeciwciałem monoklonalnym do wykrywania dimetylo-Histone H3 (Lys4) znanego również jako H3K4me2, Histone H3 (di methyl K4) i zostało zwalidowane w WB, ChIP, ChIP-seq, DB, PIA, Mplex.

Biochem/physiol Actions

Histon H3 dimetylowany na lizynie 4

Sekwencja immunizująca jest konserwowana od Tetrahymena do człowieka, więc spodziewana jest szeroka reaktywność krzyżowa między gatunkami.

Physical form

Supernatant hodowlany w 0,05% azydku sodu

Preparation Note

Przechowywać przez 1 rok w temperaturze -20°C od daty otrzymania.
Aby uzyskać maksymalny odzysk produktu, należy odwirować fiolkę przed zdjęciem nasadki.

Analysis Note

Kontrola
Ekstrakty kwasu HeLa

routinely evaluated by immunoblot on acid-extracted proteins from HeLa cells; the antibody did not detect unmethylated recombinant Histone H3 (Catalog #14-494)

Other Notes

Zastępuje: 05-790

Legal Information

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

O ile nie określono inaczej w naszym katalogu lub innej dokumentacji firmy dołączonej do produktu(-ów), nasze produkty są przeznaczone wyłącznie do użytku badawczego i nie mogą być wykorzystywane do żadnych innych celów, w tym między innymi do nieautoryzowanych zastosowań komercyjnych, zastosowań diagnostycznych in vitro, zastosowań terapeutycznych ex vivo lub in vivo lub jakiegokolwiek rodzaju konsumpcji lub zastosowania u ludzi lub zwierząt.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Klasa składowania: 12 - Non Combustible Liquids
• wgk: WGK 1
• flash_point_f: Not applicable
• flash_point_c: Not applicable