03-249

Przeciwciało RIPAb+ Ago1

clone 4G7-E12, from mouse

• Synonim(y): hAgo1, Argonaute1, eIF-2C 1, eIF2C 1, Q99, GERP95, DKFZp686M13167
• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.32
• eCl@ss: 32160702

Właściwości

• biological source: mouse
• Quality Level: 100
• clone: 4G7-E12, monoclonal
• species reactivity: human
• manufacturer/tradename: RIPAb+, Upstate^®
• technique(s): RIP: suitable, western blot: suitable
• isotype: IgG2aκ
• NCBI accession no.: NP_036331
• UniProt accession no.: Q9UL18
• shipped in: dry ice

Opis

General description

Przeciwciała RIPAb+ są oceniane przy użyciu testu immunoprecypitacji białek wiążących RNA (RIP). Każdy zestaw przeciwciał RIPAb+ zawiera ujemne przeciwciało kontrolne w celu zapewnienia swoistości reakcji RIP i jest weryfikowany pod kątem koimmunoprecypitacji RNA związanego specyficznie z immunoprecypitowanym białkiem wiążącym RNA będącym przedmiotem zainteresowania. W stosownych przypadkach zestaw RIPAb+ zawiera również startery kontrolne do ilościowego RT-PCR (startery RIP) w celu biologicznej walidacji wyników IP poprzez udaną ko-precypitację określonych docelowych RNA, takich jak informacyjny RNA. Protokół qPCR i sekwencje starterów są dostarczane, umożliwiając badaczom walidację protokołów RIP podczas stosowania przeciwciała w ich kontekście eksperymentalnym. Jeśli nie dostarczono testu specyficznego dla celu, zestaw RIPAb+ jest walidowany przy użyciu zautomatyzowanego testu opartego na mikroprzepływach poprzez wzbogacenie wykrywalnego RNA w stosunku do kontrolnej immunoprecypitacji.
Ago1 (eukariotyczny czynnik inicjacji translacji 2C 1) jest członkiem rodziny argonautów. Zawiera domenę PAZ i PIWI i jest wymagany do zatrzymania G1 i kojarzenia w odpowiedzi na głód azotowy. Może również przyczyniać się do kontroli cyklu komórkowego poprzez regulację cytokinezy. Ago1 jest również potrzebny do produkcji dojrzałego miRNA, który wpływa na rozszczepianie RNA kierowane przez miRNA, a zatem jest ważny dla tworzenia heterochromatyny i dokładnej segregacji chromosomów.

~97 kDa

Immunogen

Rekombinowane białko znakowane GST odpowiadające ludzkiemu Ago1

Application

Immunoprecypitacja białka wiążącego RNA (mikroRNA):
Reprezentatywne dane partii.
Lizat RIP przygotowany z komórek 293 (2 X 107 równoważników komórek na IP) poddano immunoprecypitacji przy użyciu 5 µg normalnej mysiej IgG (nr kat. CS200621) lub przeciwciała Anti-Ago1 (nr kat. CS207365) i zestawu do immunoprecypitacji białka wiążącego RNA Magna RIP (nr kat. 17-700).
Pomyślna immunoprecypitacja mikroRNA związanego z Ago 1 została zweryfikowana za pomocą testu TaqMan microRNA, hsa-miR-15a. (Rysunek 2). Szczegóły eksperymentu można znaleźć w protokole Magna RIP (nr kat. 17-700) lub EZ-Magna RIP (nr kat. 17-701).
Analiza Western Blot:
Reprezentatywne dane partii.
Lizat komórek HeLa sondowano anty-Ago 1, klon 4G7-E12 (0,1 µg/ml). Białka uwidoczniono przy użyciu przeciwciała wtórnego Goat Anti-Mouse IgG sprzężonego z HRP i systemu detekcji chemiluminescencji.
Strzałka wskazuje Ago 1 (~97 kDa).

Kategoria badawcza
Epigenetyka i funkcje jądrowe

Podkategoria badawcza
Białko wiążące RNA (RBP)

Zestaw RIPAb+ Ago1 -RIP Validated Antibody & Primer Set zawiera przeciwciało i specyficzne kontrolne startery PCR.

Biochem/physiol Actions

Niezależne laboratorium wykazało, że przeciwciało to nie reaguje krzyżowo z Ago2, Ago3 lub Ago4 (Azuma-Mukai A et al. (2008) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 105: 7964-7969).

Packaging

10 testów w zestawie. Zalecane użycie: ~5 µg przeciwciała na RIP (w zależności od kontekstu biologicznego).

Physical form

Anty-Ago1 (mysi monoklonalny). Jedna fiolka zawierająca 50 µg oczyszczonego białka G monoklonalnego w buforze zawierającym 0,1 M Tris-glicyny (pH 7,4), 150 mM NaCl, 0,05% azydku sodu przed dodaniem glicerolu do 30%. Przechowywać w temperaturze -20°C.
Stężenie: 0,7 mg/ml
Normalne mysie IgG. Jedna fiolka zawierająca 125 µg oczyszczonej mysiej IgG w 125 µl buforu do przechowywania zawierającego 0,1% azydku sodu. Przechowywać w temperaturze -20°C.
RIP Primer IGF2. Jedna fiolka zawierająca 75 μL po 5 μM każdego primera specyficznego dla ludzkiego mRNA IGF2. Przechowywać w temperaturze -20°C.
FOR: GCG GCT TCT ACT TCA GCA G
REV: CAG GTG TCA TAT TGG AAG AAC

Format: Oczyszczony

Oczyszczone białko G

Preparation Note

Przechowywać przez 1 rok w temperaturze -20°C od daty otrzymania. Zalecenia dotyczące postępowania: Po pierwszym rozmrożeniu, a przed zdjęciem korka, odwirować fiolkę i delikatnie wymieszać roztwór. Rozdzielić do probówek mikrowirówkowych i przechowywać w temperaturze -20°C. Unikać powtarzających się cykli zamrażania/rozmrażania, które mogą uszkodzić IgG i wpłynąć na działanie produktu.
Uwaga: Zmienność temperatur w zamrażarce poniżej -20°C może powodować zamarzanie roztworów zawierających glicerol podczas przechowywania.

Analysis Note

Kontrola
Zawiera normalną mysią IgG i startery specyficzne dla ludzkiego IGF2 mRNA.

RNA Binding Protein Immunoprecipitation:
Representative lot data
RIP Lysate prepared from 293 cells (2 X 10E7 cell equivalents per IP) were subjected to immunoprecipitation using 5 µg of either a normal mouse IgG, or 5 µg Anti-Ago1 antibody and the Magna RIP^® RNA-Binding Protein Immunoprecipitation Kit (Cat. # 17-700).
Successful immunoprecipitation of Argonaute 1-associated RNA was verified by qPCR using RIP Primers IGF2, (Figure 1).
Please refer to the Magna RIP (Cat. # 17-700) or EZ-Magna RIP (Cat. # 17-701) protocol for experimental details.

Other Notes

Stężenie: Stężenie specyficzne dla danej partii można znaleźć w certyfikacie analizy.

Legal Information

MAGNA RIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

O ile nie określono inaczej w naszym katalogu lub innej dokumentacji firmy dołączonej do produktu(-ów), nasze produkty są przeznaczone wyłącznie do użytku badawczego i nie mogą być wykorzystywane do żadnych innych celów, w tym między innymi do nieautoryzowanych zastosowań komercyjnych, zastosowań diagnostycznych in vitro, zastosowań terapeutycznych ex vivo lub in vivo lub jakiegokolwiek rodzaju konsumpcji lub zastosowania u ludzi lub zwierząt.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Klasa składowania: 10-13 - German Storage Class 10 to 13