70598

Zestaw wektorów pETBlue-1 AccepTor - Novagen

• Synonim(y): Wektor pETBlue-1, Wektory akceptujące, Wektory pETBlue, Zestawy do klonowania wektorów AccepTor, Zestawy wektorów AccepTor
• NACRES: NA.51
• UNSPSC Code: 41106610

Właściwości

• manufacturer/tradename: Novagen^®
• Quality Level: 100
• storage condition: OK to freeze
• shipped in: dry ice
• storage temp.: −70°C

Opis

General description

Zestawy do klonowania AccepTor Vector zostały zaprojektowane w celu uproszczenia procesu klonowania PCR poprzez zastosowanie termostabilnych polimeraz DNA bez proofreadingu (tj. polimerazy KOD XL oraz natywnych i rekombinowanych polimeraz Taq), które pozostawiają pojedyncze nawisy 3′-dA na produktach reakcji. Wektory AccepTor umożliwiają bezpośrednią ligację dzięki pojedynczym nawisom 3′-dU, które skutecznie annealują z przedłużeniami 3′-dA na produktach PCR. Reszty dU są przekształcane w reszty dT in vivo po transformacji.

Wektory AccepTor są dostarczane w formacie gotowym doligacji. Wystarczy wymieszać wektor z produktem PCR, dodać Clonables 2X Ligation Premix (nr kat. 70573) i transformować do komórek kompetentnych NovaBlue Singles (nr kat. 70181). Cała procedura, od produktu PCR do umieszczenia transformantów, może być wykonana w zaledwie 40 minut przy minimalnym pipetowaniu.

Zestawy wektorów AccepTor są dostępne we wstępnym rozmiarze 10 reakcji, a także w konfiguracjach 20- i 40-reakcyjnych. Wektory AccepTor są również dostępne oddzielnie, bez składników do ligacji i transformacji. Zobacz także pSTBlue-1 AccepTor Vector Giga Kit (nr kat. 71228), aby uzyskać informacje na temat korzystania z komórek kompetentnych o wyższej wydajności.

Dwa różne wektory, pSTBlue-1 i pETBlue-1, są dostępne jako zestawy wektorów AccepTor. Każdy z nich jest starannie przygotowany i przetestowany pod kątem optymalnej wydajności klonowania i zapewnia łatwą wizualizację rekombinantów poprzez niebiesko-białe badanie przesiewowe z wykorzystaniem komplementacji lacZ α. Wektor pSTBlue-1 jest wektorem ogólnego przeznaczenia z podwójnymi przeciwstawnymi promotorami T7 i SP6, zarówno z opornością na amp, jak i kan, oraz szeregiem flankujących miejsc restrykcyjnych. Wektor pETBlue-1 to nowy plazmid zaprojektowany specjalnie w celu umożliwienia ekspresji genów docelowych na wysokim poziomie, napędzanej polimerazą T7 RNA, przy jednoczesnym zapewnieniu wygody niebiesko-białej metody przesiewowej. Badanie przesiewowe jest niezależne od ekspresji, ponieważ powiązany promotor ekspresji T7lac znajduje się w przeciwnej orientacji w stosunku do promotora E. coli. pETBlue-1 ułatwia ekspresję natywnych białek bez fuzji i pozwala na wygodne subklonowanie genów docelowych już połączonych z istniejącymi znacznikami wykrywania i oczyszczania. Miejsce klonowania EcoRV jest odpowiednio rozmieszczone za miejscem wiązania rybosomu E. coli. Wstawki muszą kodować kodon startowy ATG na końcu 5′, jeśli pożądana jest ekspresja. Sekwencja jest numerowana od pierwszej zasady sekwencji promotora T7.

Oprócz systemów pETBlue, które zawierają niecięte plazmidy, wektory pETBlue są dostępne w formatach gotowych do wstawienia produktów PCR. Dostępne są dwa rodzaje zestawów: AccepTor Vector Kits i Perfectly Blunt^® Cloning Kits. AccepTor Vector Kit umożliwia bezpośrednią insercję DNA zawierającego pojedyncze zwisy 3′-dA, takie jak te amplifikowane za pomocą polimeraz DNA bez proofreadingu (np. NovaTaq DNA Polymerase), podczas gdy Perfectly Blunt Cloning Kits są przeznaczone do klonowania insertów posiadających dowolny typ końca DNA.

Features and Benefits

• Brak enzymów restrykcyjnych lub specjalnych starterów
• Bezpośrednia ligacja produktu PCR z wektorem
• Kompatybilny z polimerazami, które pozostawiają pojedyncze nawisy 3´-dA
• Niebieski/biały screening z wektorami pSTBlue-1 lub pETBlue-1
• Prosty protokół zajmuje zaledwie 40 minut od produktu PCR do posiewu transformantów

Other Notes

20 rxn :

• 2 × 0.5 µg : pETBlue-1 AccepTor Vector
• 10 µl : AccepTor Vector Positive Control Insert
• 2 × 55 µl : Clonables 2X Ligation Mix
• 1.5 ml : Nuclease-free Water
• 22 × 50 µl : NovaBlue Singles Competent Cells
• 5 × 2 ml : SOC Medium
• 10 µl : Test Plasmid
• 2 × 0.2 ml : Tuner(DE3)pLacI Competent Cells

40 rxn

• 4 × 0.5 : µg pETBlue-1 AccepTor Vector
• 10 µl : AccepTor Vector Positive Control Insert
• 4 × 55 µl : Clonables 2X Ligation Mix
• 1.5 ml : Nuclease-free Water
• 44 × 50 µl : NovaBlue Singles Competent Cells
• 9 × 2 ml : SOC Medium
• 10 µl : Test Plasmid
• 4 × 0.2 ml : Tuner(DE3)pLacI Competent Cells

Legal Information

NOVAGEN is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Perfectly Blunt is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

Komercyjne wykorzystanie niniejszego Produktu wymaga uzyskania licencji komercyjnej od EMD Millipore Corporation. Użytkowanie komercyjne obejmuje między innymi (1) użytkowanie Produktu lub jego składników w produkcji; (2) użytkowanie Produktu lub jego składników w celu świadczenia usług, dostarczania informacji lub danych innym podmiotom w zamian za wynagrodzenie; (3) użytkowanie Produktu lub jego składników (lub jakichkolwiek jego pochodnych) do celów terapeutycznych, diagnostycznych lub profilaktycznych (w tym jako część urządzenia, chipa, testu lub innego produktu); lub (4) odsprzedaż Produktu lub jego składników, niezależnie od tego, czy taki Produkt lub jego składniki są odsprzedawane do użytku w badaniach naukowych. Żadne z postanowień zawartych w niniejszym dokumencie nie stanowi ani nie gwarantuje, że do korzystania z niniejszego Produktu nie są wymagane dodatkowe prawa osób trzecich.

Toksyczność: Wiele wartości toksyczności, patrz MSDS

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.