17-10108

ChIPAb+ Dimetylo-Histon H3 (Lys27) - przeciwciało z walidacją ChIP i zestaw primerów, królicze monoklonalne

culture supernatant, from rabbit

• Synonim(y): H3K27me2, histon H3 (di metyl K27), rodzina histonów H3, członek M, histon H3, rodzina 2, histon 2, H3c, klaster histonów 2, H3c
• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.52
• eCl@ss: 32160702
• Clone: monoclonal
• Species reactivity: vertebrates
• Application: ChIP, IP, WB, cell based assay
• Citations: 1

Właściwości

• biological source: rabbit
• Quality Segment: 100
• antibody form: culture supernatant
• clone: monoclonal
• species reactivity: vertebrates
• manufacturer/tradename: ChIPAb+, Upstate^®
• technique(s): ChIP: suitable, cell based assay: suitable, immunoprecipitation (IP): suitable, western blot: suitable
• isotype: IgG
• NCBI accession no.: NP_003484.1
• UniProt accession no.: Q71DI3
• shipped in: dry ice

Opis

General description

Histony są wysoce konserwatywnymi białkami, które służą jako rusztowanie strukturalne dla organizacji jądrowego DNA w chromatynę. Cztery podstawowe histony, H2A, H2B, H3 i H4, łączą się w oktamer (po 2 cząsteczki każdego z nich). Następnie 146 par zasad DNA owija się wokół oktameru, tworząc nukleosom. Histony są modyfikowane potranslacyjnie przez działanie enzymów zarówno w jądrze, jak i cytoplazmie. Modyfikacje te regulują transkrypcję, naprawę, rekombinację i replikację DNA. Najczęściej badanymi modyfikacjami są acetylacja, fosforylacja, metylacja i ubikwitynacja. Modyfikacje te mogą zmieniać lokalną architekturę chromatyny lub rekrutować czynniki trans-działające, które rozpoznają określone modyfikacje histonów (hipoteza "kodu histonowego"). Modyfikacje zachodzą głównie na N-końcowych i C-końcowych ogonach, które rozciągają się poza cząsteczkę rdzenia nukleosomu. Histon H3 jest metylowany w pozycji Lys27 przez EZH2, a nadekspresja EZH2 jest związana zarówno z rakiem piersi, jak i rakiem prostaty. Metylacja H3K27 jest zaangażowana w inaktywację chroosomu X, imprinting, rytmy okołodobowe i utrzymanie komórek macierzystych. H3K27me2 jest markerem klasycznej heterochromatyny.

Wszystkie przeciwciała ChIPAb+ są indywidualnie walidowane pod kątem wytrącania chromatyny, w każdej partii, za każdym razem. Każdy zestaw przeciwciał ChIPAb+ zawiera startery kontrolne (testowane co partię za pomocą qPCR) w celu biologicznej walidacji wyników IP w kontekście specyficznym dla locus. Protokół qPCR i sekwencje starterów są dostarczane, umożliwiając badaczom walidację protokołów ChIP przy użyciu naszego przeciwciała w kontekście chromatyny. Każdy zestaw zawiera również ujemne przeciwciało kontrolne, aby zapewnić specyficzność reakcji ChIP.
Zestaw ChIPAb+ Dimethyl-Histone H3 (Lys27) zawiera przeciwciało Dimethyl-Histone H3 (Lys27), supernatant królika z kontrolą ujemną oraz startery qPCR, które amplifikują region 110 bp ludzkiego promotora β-globiny. Dimetylo-Histon H3 (Lys27) i kontrole ujemne są dostarczane w skalowalnym rozmiarze reakcji "per ChIP" i mogą być wykorzystane do funkcjonalnej walidacji wytrącania chromatyny związanej z Dimetylo-Histonem H3 (Lys27).

~17 kDa

Immunogen

Epitop: Dimetyl Lys27

Peptyd zawierający sekwencję (ARme2KSA), w której me2 odpowiada dimetylo lizynie przy reszcie 27 ludzkiego histonu H3.

Application

Immunoprecypitacja chromatyny:
Reprezentatywne dane partii.
Sonikowaną chromatynę przygotowaną z komórek HeLa (1 X 10E6 równoważników komórek na IP) poddano immunoprecypitacji chromatyny przy użyciu 2 µL supernatantu kontroli negatywnej lub 2 µL anty-dimetylo-histonu H3 (Lys27) i zestawu Magna ChIP^® A (nr kat. 17-610).
Pomyślna immunoprecypitacja fragmentów DNA związanych z dimetylo-histonem H3 (Lys27) została zweryfikowana za pomocą qPCR przy użyciu starterów ChIP, ludzkiej β-globiny jako locus pozytywnego i starterów promotora GAPDH jako locus negatywnego (patrz rysunki). Dane przedstawiono jako procentowy wkład każdej próbki IP w stosunku do chromatyny wejściowej dla każdego amplikonu i próbki ChIP, jak wskazano.
Szczegółowe informacje dotyczące eksperymentu można znaleźć w protokole EZ-Magna ChIP A (nr kat. 17-408) lub EZ-ChIP (nr kat. 17-371).

Analiza Western Blot:
Reprezentatywne dane partii.
Rozcieńczenie 1:1000-1:5000 poprzedniej partii wykryło dimetylo-histonę H3 w białkach ekstrahowanych kwasem z komórek HeLa, ale nie wykryło niemetylowanej rekombinowanej histony H3 (nr kat. 14-494).
Rekombinowany histon H3 (pas 1) i osad kwasu z komórek HeLa (pas 2) zostały rozdzielone przez elektroforezę, przeniesione na nitrocelulozę i sondowane anty-dimetylo-histonem H3 (Lys27) (rozcieńczenie 1:1000).
Białka uwidoczniono przy użyciu koziego przeciwciała drugorzędowego przeciw królikowi sprzężonego z HRP i systemu detekcji chemiluminescencji.
Strzałka wskazuje dimetylo-histon H3 (~17 kDa) (patrz rysunki).

Test inhibicji peptydowej (PIA):
Reprezentatywne dane partii.
0,5-2 μM peptydów histonu H3 zawierających dimetylo-Lys27 zniosło wykrywanie histonu H3 przez anty-dimetylo-histon H3 (Lys27) (rozcieńczenie 1:1000) w immunoblotach białek ekstrahowanych kwasem z komórek HeLa.
Białka ekstrahowane kwasem z komórek HeLa rozdzielono za pomocą elektroforezy, przeniesiono na nitrocelulozę i sondowano anty-dimetylo-histonem H3 (Lys27) (pas 1) lub anty-dimetylo-histonem H3 (Lys27) wstępnie zaabsorbowanym 0,5 mM peptydów histonu H3 zawierających następujące modyfikacje:
Lane 2: dimetylo-lizyna 23
Pas 3: dimetylo-lizyna 27
Pas 4: dimetylo-lizyna 9
Zastosowano rozcieńczenie 1:1000 pierwotnego przeciwciała.
Białka uwidoczniono przy użyciu koziego przeciwciała drugorzędowego przeciw królikowi sprzężonego z HRP i systemu detekcji chemiluminescencji.
Strzałka wskazuje dimetylo-histon H3 (~17 kDa) (patrz rysunki).

Zestaw ChIPAb+ Dimethyl-Histone H3 (Lys27) -ChIP Validated Antibody & Primer Set zawiera przeciwciało i specyficzne kontrolne startery PCR.

Research Category
Epigenetics & Nuclear Function

Research Sub Category
Histones

Biochem/physiol Actions

Oczekiwana szeroka reaktywność krzyżowa między gatunkami, oparta na identyczności sekwencji u większości gatunków.

To przeciwciało rozpoznaje histon H3 dimetylowany na Lys27.

Packaging

25 testów w zestawie. Zalecane użycie: ~2 μL przeciwciała na immunoprecypitację chromatyny (w zależności od kontekstu biologicznego).

Physical form

Anty-Dimethyl-Histone H3 (Lys27) (królicze przeciwciało monoklonalne). Jedna fiolka zawierająca 50 µl supernatantu hodowli w 0,05% azydku sodu. Przechowywać w temperaturze -20°C.

Supernatant kontroli negatywnej. Jedna fiolka zawierająca 100 µl supernatantu hodowli króliczej w 0,05% azydku sodu. Przechowywać w temperaturze -20°C.

Primery ChIP, ludzka β-globina. Jedna fiolka zawierająca 75 μL po 5 μM każdego primera specyficznego dla ludzkiego promotora β-globiny. Przechowywać w temperaturze -20°C.
FOR: AGG ACA GGT ACG GCT GTC ATC
REV: TTT ATG CCC AGC CCT GGC TC

Unpurified supernatant

Preparation Note

1 rok w temperaturze -20°C od daty wysyłki
Zalecenia dotyczące postępowania: Po otrzymaniu, a przed zdjęciem nasadki, odwirować fiolkę i delikatnie wymieszać roztwór. Rozdzielić do probówek do mikrowirówki i przechowywać w temperaturze -20°C. Unikać powtarzających się cykli zamrażania/rozmrażania, które mogą uszkodzić IgG i wpłynąć na działanie produktu.

Analysis Note

Kontrola
Zawiera supernatant królika kontroli ujemnej i startery specyficzne dla ludzkiego promotora β-globiny.

Chromatin Immunoprecipitation:
Sonicated chromatin prepared from HeLa cells (1 X 10E6 cell equivalents per IP) were subjected to chromatin immunoprecipitation using either 2 µL of Negative Control Supernatant or 2 µL of Anti-dimethyl-Histone H3 (Lys27) and the Magna ChIP^® A Kit (Cat. # 17-610).
Successful immunoprecipitation of dimethyl-Histone H3 (Lys27)-associated DNA fragments was verified by qPCR using ChIP Primers, human β-globin (Please see figures).
Please refer to the EZ-Magna ChIP A (Cat. # 17-408) or EZ-ChIP (Cat. # 17-371) protocol for experimental details.

Legal Information

MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

Unless otherwise stated in our catalog or other company documentation accompanying the product(s), our products are intended for research use only and are not to be used for any other purpose, which includes but is not limited to, unauthorized commercial uses, in vitro diagnostic uses, ex vivo or in vivo therapeutic uses or any type of consumption or application to humans or animals.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Klasa składowania: 10 - Combustible liquids
• wgk: WGK 1