17-10046

ChIPAb+ Histone H3 (CT) - przeciwciało z walidacją ChIP i zestaw primerów, królicze monoklonalne

culture supernatant, from rabbit

• Synonim(y): H3, histon H3, rodzina histonów H3, członek T, histon 3, H3, klaster histonów 3, H3
• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.52
• eCl@ss: 32160702
• Clone: monoclonal
• Species reactivity: Saccharomyces cerevisiae, rat, human, chicken, mouse, yeast
• Application: ChIP, DB, IP, WB
• Citations: 18

Właściwości

• biological source: rabbit
• Quality Level: 100
• antibody form: culture supernatant
• clone: monoclonal
• species reactivity: Saccharomyces cerevisiae, rat, human, chicken, mouse, yeast
• manufacturer/tradename: ChIPAb+, Upstate^®
• technique(s): ChIP: suitable, dot blot: suitable, immunoprecipitation (IP): suitable, western blot: suitable
• isotype: IgG
• NCBI accession no.: NP_003484
• UniProt accession no.: Q16695
• shipped in: dry ice

Opis

General description

Histon H3 jest jednym z pięciu głównych białek histonowych zaangażowanych w strukturę chromatyny w komórkach eukariotycznych. Posiadając główną domenę kulistą i długi N-końcowy ogon, H3 jest zaangażowany w strukturę nukleosomów o strukturze "koralików na sznurku". Białka histonowe są wysoce modyfikowane potranslacyjnie, a histon H3 jest najbardziej zmodyfikowanym z pięciu histonów. Sam termin "histon H3" jest celowo niejednoznaczny, ponieważ nie rozróżnia wariantów sekwencji ani stanu modyfikacji. Histon H3 jest ważnym białkiem w rozwijającej się dziedzinie epigenetyki, gdzie uważa się, że jego warianty sekwencji i zmienne stany modyfikacji odgrywają rolę w dynamicznej i długoterminowej regulacji genów.

Wszystkie przeciwciała ChIPAb+ są indywidualnie walidowane pod kątem wytrącania chromatyny, w każdej partii, za każdym razem. Każdy zestaw przeciwciał ChIPAb+ zawiera startery kontrolne (testowane co partię za pomocą qPCR) w celu biologicznej walidacji wyników IP w kontekście specyficznym dla locus. Protokół qPCR i sekwencje starterów są dostarczane, umożliwiając badaczom walidację protokołów ChIP przy użyciu naszego przeciwciała w kontekście chromatyny. Każdy zestaw zawiera również ujemne przeciwciało kontrolne, aby zapewnić specyficzność reakcji ChIP.
Zestaw ChIPAb+ Histone H3 (C-term) zawiera przeciwciało Histone H3 (C-term), supernatant kontroli negatywnej (królik) i startery qPCR, które amplifikują region 110 bp ludzkiej β-globiny. Histone H3 (C-term) i kontrole negatywne są dostarczane w skalowalnym rozmiarze reakcji "per ChIP" i mogą być wykorzystane do funkcjonalnej walidacji wytrącania chromatyny związanej z Histone H3.

~17 kda

Immunogen

Epitop: C-Terminus

Syntetyczny peptyd sprzężony z KLH, odpowiadający C-końcowi ludzkiego histonu H3.

Application

Immunoprecypitacja chromatyny:
Sonikowaną chromatynę przygotowaną z komórek HeLa (1 X¹⁰⁶ równoważników komórek na IP) poddano immunoprecypitacji chromatyny przy użyciu 4 µL supernatantu kontroli negatywnej lub 4 µL anty-histonu H3 (C-termin) i zestawu Magna ChIP^® A (nr kat. 17-610).
Pomyślna immunoprecypitacja fragmentów DNA związanych z histonem H3 została zweryfikowana przez qPCR przy użyciu starterów ChIP, β-globiny oraz starterów promotora GAPDH. (Patrz rysunki). Dane przedstawiono jako procentowy wkład każdej próbki IP w stosunku do chromatyny wejściowej dla każdego amplikonu i próbki ChIP, jak wskazano.

Szczegółowe informacje dotyczące eksperymentu można znaleźć w protokole EZ-Magna ChIP A (nr kat. 17-408) lub EZ-ChIP (nr kat. 17-371).

Analiza Western Blot:
Reprezentatywne dane partii.
Ekstrakty kwasów z komórek HeLa poddanych działaniu kolcemidu rozdzielono za pomocą elektroforezy, przeniesiono na nitrocelulozę i wysondowano anty-Histone H3 (C-term) (rozcieńczenie 1:1000).
Białka wizualizowano przy użyciu koziego przeciwciała drugorzędowego przeciw królikowi sprzężonego z HRP i systemu detekcji chemiluminescencji. (Patrz rysunki).


Analiza Western Blot:
Reprezentatywne dane partii.
Białka ekstrahowane kwasem z komórek HeLa nietraktowanych (Lane 1), traktowanych kolcemidem (Lane 2). Ekstrakty jądrowe HeLa (Lane 3), komórki HeLa ekstrahowane kwasem traktowane maślanem sodu (Lane 4), nietraktowane (Lane 5) i niemodyfikowany rekombinowany histon H3 (Lane 6) zostały rozdzielone za pomocą elektroforezy, przeniesione na nitrocelulozę i sondowane poprzednią partią anty-Histone H3 (C-term) (rozcieńczenie 1:5000).

Białka wizualizowano przy użyciu koziego przeciwciała drugorzędowego przeciw królikowi sprzężonego z HRP i systemu detekcji chemiluminescencji. (Patrz rysunki).

Zestaw ChIPAb+ Histone H3 (C-term) -ChIP Validated Antibody & Primer Set zawiera przeciwciało i specyficzne kontrolne startery PCR.

Research Category
Epigenetics & Nuclear Function

Research Sub Category
Histones

Biochem/physiol Actions

Oczekiwana szeroka reaktywność krzyżowa ze względu na homologię sekwencji.

Rozpoznaje histon H3 w pobliżu C-końca.

Packaging

25 testów w zestawie. Zalecane użycie: ~4 μL przeciwciała na immunoprecypitację chromatyny (w zależności od kontekstu biologicznego).

Physical form

Anty-Histone H3 (C-term) (królicza monoklonalna IgG). Jedna fiolka zawierająca 100 µl supernatantu hodowli w 0,05% azydku sodu. Przechowywać w temperaturze -20°C.

Supernatant kontroli negatywnej (królik). Jedna fiolka zawierająca 100 µL supernatantu hodowli w 0,05% azydku sodu. Przechowywać w temperaturze -20°C.

Primery ChIP, β-Globina.
Jedna fiolka zawierająca 75 μL po 5 μM każdego primera specyficznego dla ludzkiej β-globiny. Przechowywać w temperaturze -20°C.
FOR: AGG ACA GGT ACG GCT GTC ATC
REV: TTT ATG CCC AGC CCT GGC TC

Preparation Note

Przechowywać przez 1 rok w temperaturze -20°C od daty otrzymania. Zalecenia dotyczące postępowania: Po pierwszym rozmrożeniu, a przed zdjęciem korka, odwirować fiolkę i delikatnie wymieszać roztwór. Rozdzielić do probówek mikrowirówkowych i przechowywać w temperaturze -20°C. Unikać powtarzających się cykli zamrażania/rozmrażania, które mogą uszkodzić IgG i wpłynąć na działanie produktu.

Analysis Note

Kontrola
Zawiera supernatant kontroli ujemnej (królik) i startery specyficzne dla ludzkiej β-globiny.

Chromatin Immunoprecipitation:
Sonicated chromatin prepared from HeLa cells (1 X 10⁶ cell equivalents per IP) were subjected to chromatin immunoprecipitation using 4 µL of either Negative Control Supernatant or 4 µL of Anti-Histone H3 (C-term) and the Magna ChIP^® A Kit (Cat. # 17-610). Successful immunoprecipitation of Histone H3 associated DNA fragments was verified by qPCR using ChIP Primers, β-Globin (Please see figures).

Please refer to the EZ-Magna ChIP A (Cat. # 17-408) or EZ-ChIP (Cat. # 17-371) protocol for experimental details.

Legal Information

MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

Unless otherwise stated in our catalog or other company documentation accompanying the product(s), our products are intended for research use only and are not to be used for any other purpose, which includes but is not limited to, unauthorized commercial uses, in vitro diagnostic uses, ex vivo or in vivo therapeutic uses or any type of consumption or application to humans or animals.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Klasa składowania: 10 - Combustible liquids
• wgk: WGK 1