17-675

ChIPAb+ Histone H3 (Unmodified Lys4) - przeciwciało i zestaw primerów zweryfikowane pod kątem ChIP

clone CMA301, from mouse, purified by using protein G

• Synonim(y): Rodzina histonów H3, członek T, histon 3, H3, klaster histonów 3, H3
• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.52
• eCl@ss: 32160702
• Clone: CMA301, monoclonal
• Species reactivity: human, vertebrates
• Application: ChIP, WB
• Citations: 1

Właściwości

• Quality Segment: 100
• biological source: mouse
• clone: CMA301, monoclonal
• purified by: using protein G
• species reactivity: human, vertebrates
• manufacturer/tradename: ChIPAb+, Upstate^®
• technique(s): ChIP: suitable, western blot: suitable
• isotype: IgG2bκ
• NCBI accession no.: NM_003493
• UniProt accession no.: Q66I33
• shipped in: dry ice

Opis

General description

Histon H3 o masie ~17 kDa

Wszystkie przeciwciała ChIPAb+ są indywidualnie walidowane pod kątem wytrącania chromatyny, w każdej partii, za każdym razem. Każdy zestaw przeciwciał ChIPAb+ zawiera startery kontrolne (testowane co partię za pomocą qPCR) w celu biologicznej walidacji wyników IP w kontekście specyficznym dla locus. Protokół qPCR i sekwencje starterów są dostarczane, umożliwiając badaczom walidację protokołów ChIP przy użyciu naszego przeciwciała w kontekście chromatyny. Każdy zestaw zawiera również ujemne przeciwciało kontrolne, aby zapewnić specyficzność reakcji ChIP.
Zestaw ChIPAb+ Histone H3 (Unmodified Lys4) zawiera przeciwciało Anti-Histone H3 (unmodified Lys4), przeciwciało kontroli negatywnej (oczyszczone mysie IgG) oraz startery qPCR, które amplifikują region 110 bp w promotorze ludzkiego genu β-globiny. Histon H3 (niezmodyfikowany Lys4) i przeciwciała kontroli ujemnej są dostarczane w skalowalnym rozmiarze reakcji "na ChIP" i mogą być stosowane do funkcjonalnej walidacji wytrącania chromatyny związanej z histonem H3 (niezmodyfikowanym Lys4).

Immunogen

Epitop: a.a. 1-12

Oczyszczone przeciwciało histone H3 (Unmodified Lys4) jest wytwarzane przeciwko syntetycznemu peptydowi odpowiadającemu aminokwasom 1-12 histonu H3.

Application

Immunoprecypitacja chromatyny:
Sonikowaną chromatynę przygotowaną z komórek HeLa (2 X¹⁰⁶ równoważników komórek na IP) poddano immunoprecypitacji chromatyny przy użyciu 2 µg normalnej mysiej IgG lub przeciwciała przeciw histonowi H3 (niemodyfikowanemu Lys4) i zestawu Magna ChIP G Kit (nr kat. 17-611). Pomyślna immunoprecypitacja fragmentów DNA związanych z histonem H3 została zweryfikowana za pomocą qPCR przy użyciu Primerów ChIP β-globiny w porównaniu z Primerami kontrolnymi promotora GAPDH. Dane przedstawiono jako procentowy wkład każdej próbki IP w stosunku do chromatyny wejściowej, ze wskazanymi zestawami primerów (patrz rysunki).

Analiza Western Blot:
Wyekstrahowane kwasem białka z komórek HeLa (Lane 1) i rekombinowane histony (Lane 2-6) zostały rozdzielone metodą elektroforezy, przeniesione na membranę PVDF i wysondowane anty-Histone H3 (Unmodified Lys4) (0,1 μg/ml). Białka wizualizowano przy użyciu koziego przeciwciała anty-mysiego sprzężonego z HRP (nr kat. AP124P) i systemu detekcji chemiluminescencji (patrz rysunki).

Zestaw ChIPAb+ Histone H3 (Unmodified Lys4) -ChIP Validated Antibody & Primer Set zawiera przeciwciało i specyficzne kontrolne startery PCR.

Research Category
Epigenetics & Nuclear Function

Research Sub Category
Chromatin Biology

Biochem/physiol Actions

Rozpoznaje niezmodyfikowany histon H3 (Lys4) o masie cząsteczkowej 17 kDa. Specyficzność epitopowa przeciwciała określona za pomocą testu ELISA w pobliżu Lys4. Przeciwciało toleruje modyfikacje Lys9 i Ser10, ale nie Lys4 lub Thr31.

Sekwencja peptydowa jest identyczna w wielu gatunkach zwierząt i roślin, więc spodziewana jest szeroka reaktywność krzyżowa.

Packaging

25 testów na zestaw, ~2 μg na immunoprecypitację chromatyny

Physical form

Anty-Histone H3 (Unmodified Lys4) (mysie przeciwciało monoklonalne IgG2bκ, klon CMA301). Jedna fiolka zawierająca 50 μg przeciwciała oczyszczonego z białka G w 50 μL PBS zawierającego 0,05% azydku sodu. Przechowywać w temperaturze -20°C.

Normalne mysie IgG. Dwie fiolki zawierające 25 μg oczyszczonej mysiej IgG w 25 μL buforu do przechowywania zawierającego 0,1% azydku sodu. Przechowywać w temperaturze -20°C.

Primery ChIP β-Globiny. Jedna fiolka zawierająca 75 μL po 5 μM każdego primera specyficznego dla ludzkiego promotora β-globiny. Przechowywać w temperaturze -20°C.
FOR: AGG ACA GGT ACG GCT GTC ATC
REV: TTT ATG CCC AGC CCT GGC TC

Preparation Note

Przechowywać przez 1 rok w temperaturze -20°C od daty otrzymania. Rozcieńczać po rozmrożeniu, unikać cykli zamrażania-rozmrażania.

Analysis Note

Kontrola
Zawiera mysie przeciwciało IgG kontroli ujemnej i startery kontrolne specyficzne dla ludzkiego promotora β-globiny.

Chromatin Immunoprecipitation:
Sonicated chromatin prepared from HeLa cells (1 X 10⁶ cell equivalents per IP) were subjected to chromatin immunoprecipitation using 2 µg of either a normal mouse IgG or Anti-Histone H3 (Unmodified Lys4) antibody and the Magna ChIP G Kit (Cat. #17-611). Successful immunoprecipitation of histone H3 (Unmodified Lys4) associated DNA fragments was verified by qPCR using β-Globin ChIP Primers (Please see figures).
Please refer to the EZ-Magna G ChIP (Cat. #17-409) or EZ-ChIP (Cat. #17-371) protocol for experimental details.

Legal Information

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

Unless otherwise stated in our catalog or other company documentation accompanying the product(s), our products are intended for research use only and are not to be used for any other purpose, which includes but is not limited to, unauthorized commercial uses, in vitro diagnostic uses, ex vivo or in vivo therapeutic uses or any type of consumption or application to humans or animals.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Klasa składowania: 10 - Combustible liquids
• wgk: WGK 2