CBA054

Zestaw do oznaczania aktywności kalpainy 1/2 InnoZyme

• Kod UNSPSC: 41116133
• NACRES: NA.84

Właściwości

• zastosowanie: sufficient for 96 tests
• Poziom jakości: 100
• opakowanie: pkg of 1 96-well plate(s)
• producent / nazwa handlowa: Calbiochem^®
• warunki przechowywania: OK to freeze
• assay range: standard curve range: 63-1000 ng/mL; (as measured with purified human calpain 1)
• moc wejściowa: sample type tissue extract(s); sample type cell lysate
• metoda wykrywania: fluorometric
• Warunki transportu: wet ice

Opis

Opis ogólny

Wysoce czuły i specyficzny test do pomiaru aktywności kalpain 1 i 2 w próbkach biologicznych, takich jak lizat komórkowy lub ekstrakty tkankowe oraz do badań przesiewowych inhibitorów enzymów. Kalpainy (zależne od jonów wapnia papainopodobne proteazy cysteinowe) są szeroko rozpowszechnione we wszystkich komórkach ssaków. Pośredniczą w indukowanej wapniem aktywacji szlaku MAPK Erk1/Erk2 i uważa się, że uczestniczą w wewnątrzkomórkowym przetwarzaniu sygnału poprzez ograniczoną proteolizę swoich celów.

- Czuły: wykrywa aktywność kalpainy przy 63-1000 ng/ml
- Specyficzny: substrat i inhibitor zoptymalizowany do specyficznego wykrywania aktywności kalpainy
- Wszechstronny: jednorodny 96-dołkowy format może być używany z próbkami biologicznymi lub do badań przesiewowych inhibitorów
- Wygodny: Zawiera wszystkie odczynniki do oznaczania próbek w ciągu 30 minut

Komponenty

96-Well Plate, Calpain 1 Control, Substrate, Assay Buffer, Activation Buffer, Inhibitor, Reducing Agent, Plate Sealer and a user protocol.

Ostrzeżenie

Toksyczność: Drażniący (B)

Zasada

Zestaw Calbiochem InnoZyme Calpain 1 & 2 Activity Kit jest przeznaczony do pomiaru aktywności kalpain 1 i 2 w próbkach biologicznych, takich jak lizaty komórkowe lub ekstrakty tkankowe oraz do badań przesiewowych inhibitorów enzymów.

Uwaga dotycząca przygotowania

Uwaga: Kalpaina jest enzymem wrażliwym na temperaturę. Rozcieńczenia kontroli kalpainy muszą być przygotowywane przy użyciu schłodzonego buforu testowego i przechowywane w lodzie przez cały czas.Wytyczne dotyczące przygotowania próbek:- Zalecane stężenie białka dla lizatów komórkowych wynosi ≥2 mg/ml, jak określono przy użyciu standardowego testu białkowego (np. testu Non-Interfering Protein Assay, nr kat. 488250 lub testu białkowego BCA, nr kat. 488250). No. 488250 lub BCA Protein Assay, Cat. Nr kat. 71285) - Zalecany współczynnik rozcieńczenia dla lizatów komórkowych o stężeniu białka ≥2 mg/ml wynosi ~5 lub więcej.

Wszystkie odczynniki niezbędne do przeprowadzenia testu są dostarczane wraz z zestawem. Wszystkie odczynniki (z wyjątkiem kontroli kalpainy i buforu testowego) należy ogrzać do temperatury pokojowej (15-25°C) tuż przed użyciem. Poniższe wytyczne dotyczące przygotowania odczynników zapewnią wystarczającą objętość dla jednej 96-dołkowej płytki.- Kontrola, ludzka kalpaina 1, rozcieńczona: Rozcieńczyć kontrolę, ludzką kalpainę 1 100-400-krotnie schłodzonym buforem testowym; utrzymywać w lodzie przez cały czas.- Bufor aktywacyjny z czynnikiem redukującym: Dodać 80 µl czynnika redukującego do 9,92 ml buforu aktywacyjnego.- Substrat (1X): Rozcieńczyć substrat 1:25 dodając 200 µl substratu do 4,8 ml buforu testowego- Inhibitor (1X): Rozcieńczyć inhibitor w następujący sposób:1. Rozcieńczyć inhibitor w stosunku 1:50, dodając 2 µl inhibitora do 98 µl buforu testowego2. Dodać 50 µl rozcieńczenia 1:50 (krok 1) do 4,95 ml buforu aktywacyjnego z czynnikiem redukującym.

Przechowywanie i stabilność

Po dostarczeniu przechowywać kontrolę, ludzką kalpainę 1 w temperaturze -70°C, a pozostałe składniki w temperaturze -20°C. Wszystkie składniki zestawu po otwarciu mogą być przechowywane do 3 miesięcy w następujących warunkach:

Przechowywać w lodówce (4°C): Bufor testowy, bufor aktywacyjny, substrat, inhibitor i płytka 96-dołkowa.

Zamrażarka (-20°C): Czynnik redukujący

Zamrażarka (-70°C): Kontrola, ludzka kalpaina 1



Uwaga: Po pierwszym użyciu kontrolę, ludzką kalpainę 1 należy rozdzielić na podwielokrotności i przechowywać w temperaturze -70°C. Unikać cykli zamrażania/rozmrażania.

Komentarz do analizy

Kontrola pozytywna
Kalpaina 1

Inne uwagi

Higuchi, M., et al. 2005. J. Biol. Chem.280, 15229;
Tompa, P., et al. 2004. J. Biol. Chem.279, 20775;
Veeranna, et al. 2004. Am. J. Pathol.165, 795;
Dainese, E., et al. 2002. J. Biol. Chem.277, 40296;
Wang, K.K., et al. 2000. Trends Neurosci.23, 20;
Black, R.A., et al. 1997. Nature385, 729;
Molinari, M. and Carafoli, E. 1997. J. Membr. Biol.156, 1;
Sorimachi, H., et al. 1997. Biochem. J.328, 721.

Informacje prawne

CALBIOCHEM is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Piktogramy: GHS08
• Hasło ostrzegawcze: Danger
• Zwroty wskazujące rodzaj zagrożenia: H360D
• Zwroty wskazujące środki ostrożności: P201 - P202 - P280 - P308 + P313 - P405 - P501
• Klasyfikacja zagrożeń: Repr. 1B
• Kod klasy składowania: 6.1C - Combustible acute toxic Cat.3 / toxic compounds or compounds which causing chronic effects