17-10032

ChIPAb+ Trimethyl-Histone H3 (Lys36) - przeciwciało z walidacją ChIP i zestaw primerów, królicze monoklonalne

from rabbit

• Synonim(y): H3K36me3, histon H3 (tri metyl K36), rodzina histonów H3, członek T, histon 3, H3, klaster histonów 3, H3
• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.32
• eCl@ss: 32160702
• Clone: monoclonal
• Species reactivity: human, chicken
• Application: ChIP, DB, IP, WB, cell based assay
• Citations: 10

Właściwości

• biological source: rabbit
• Quality Segment: 100
• antibody form: purified immunoglobulin
• clone: monoclonal
• species reactivity: human, chicken
• manufacturer/tradename: ChIPAb+, Upstate^®
• technique(s): ChIP: suitable, cell based assay: suitable, dot blot: suitable, immunoprecipitation (IP): suitable, western blot: suitable
• isotype: IgG
• NCBI accession no.: NP_003484
• UniProt accession no.: Q16695
• shipped in: dry ice

Opis

General description

Histony są wysoce konserwatywnymi białkami, które służą jako rusztowanie strukturalne dla organizacji jądrowego DNA w chromatynę. Cztery podstawowe histony, H2A, H2B, H3 i H4, łączą się w oktamer (po 2 cząsteczki każdego z nich). Następnie 146 par zasad DNA owija się wokół oktameru, tworząc nukleosom, podstawową podjednostkę chromatyny. Histony są modyfikowane potranslacyjnie przez działanie enzymów zarówno w jądrze, jak i cytoplazmie. Modyfikacje te regulują transkrypcję, naprawę, rekombinację i replikację DNA. Najczęściej badanymi modyfikacjami są acetylacja, fosforylacja, metylacja i ubikwitynacja. Modyfikacje te mogą zmieniać lokalną architekturę chromatyny lub rekrutować czynniki trans-działające, które rozpoznają określone modyfikacje histonów (hipoteza "kodu histonowego"). Modyfikacje występują głównie na N-końcowych i C-końcowych ogonach, które rozciągają się poza cząsteczkę rdzenia nukleosomu. Metylacja histonu H3 na Lys36 (H3K36me2/3) jest ściśle związana z aktywnie transkrybowanymi genami, a modyfikacja ta występuje głównie w regionie kodującym, co sugeruje, że metylacja H3K36 jest niezbędna do wydajnej elongacji i procesywności polimerazy RNA II.

Wszystkie przeciwciała ChIPAb+ są indywidualnie walidowane pod kątem wytrącania chromatyny, w każdej partii, za każdym razem. Każdy zestaw przeciwciał ChIPAb+ zawiera startery kontrolne (testowane co partię za pomocą qPCR) w celu biologicznej walidacji wyników IP w kontekście specyficznym dla locus. Protokół qPCR i sekwencje starterów są dostarczane, umożliwiając badaczom walidację protokołów ChIP przy użyciu naszego przeciwciała w kontekście chromatyny. Każdy zestaw zawiera również ujemne przeciwciało kontrolne, aby zapewnić specyficzność reakcji ChIP.
Zestaw ChIPAb+ Trimethyl-Histone H3 (Lys36) zawiera przeciwciało Trimethyl-Histone H3 (Lys36), przeciwciało kontroli ujemnej (normalne królicze IgG) oraz startery qPCR, które amplifikują region 147 bp ludzkiego intronu BDNF. Przeciwciała Trimethyl-Histone H3 (Lys36) i przeciwciała kontroli ujemnej są dostarczane w skalowalnym rozmiarze reakcji "per ChIP" i mogą być stosowane do funkcjonalnej walidacji wytrącania chromatyny związanej z Trimethyl-Histone H3 (Lys36).

~17 kDa

Immunogen

Epitop: Trimetylowana Lys36

Syntetyczny peptyd sprzężony z KLH zawierający sekwencję ....GVme3KKP..., w której me3K odpowiada ludzkiemu trimetylo-histonowi H3 (Lys36).

Application

Immunoprecypitacja chromatyny:
Sonikowaną chromatynę przygotowaną z komórek HeLa (1 X¹⁰⁶ równoważników komórek na IP) poddano immunoprecypitacji chromatyny przy użyciu 2 µg normalnej króliczej IgG lub 2 µl anty-trimetylo-histonu H3 (Lys36) i zestawu Magna ChIP A (nr kat. 17-610). Pomyślną immunoprecypitację fragmentów DNA związanych z trimetylo-histonem H3 (Lys36) zweryfikowano za pomocą qPCR przy użyciu starterów ChIP, BDNF Intron jako locus pozytywnego i starterów promotora GAPDH jako locus negatywnego (patrz rysunki). Dane przedstawiono jako procentowy wkład każdej próbki IP w stosunku do chromatyny wejściowej dla każdego amplikonu i próbki ChIP, jak wskazano.
Szczegółowe informacje dotyczące eksperymentu można znaleźć w protokole EZ-Magna ChIP A (nr kat. 17-408) lub EZ-ChIP (nr kat. 17-371).

Analiza Western Blot i inhibicja peptydowa:
Reprezentatywne dane partii.
Rekombinowany histon H3 (nr kat. 14-411, pas 1) i histony rdzenia kurczaka (nr kat. 13-107, pas 2) zostały rozdzielone za pomocą elektroforezy, przeniesione na nitrocelulozę i wysondowane anty-trimetylo-histonem H3 (Lys36) (rozcieńczenie 1:1000) lub anty-trimetylo-histonem H3 (Lys36) wstępnie adsorbowanym 1mM peptydami histonu H3 zawierającymi następujące modyfikacje:
Lane 3: monometylo-lizyna 36
Pas 4: dimetylo-lizyna 36
Pas 5: trimetylo-lizyna 36
Pas 6: niezmodyfikowany
Białka wizualizowano przy użyciu koziego przeciwciała drugorzędowego przeciw królikowi sprzężonego z HRP i systemu detekcji chemiluminescencji. (Patrz rysunki).

Analiza kropkowa peptydów:
Reprezentatywne dane partii.
Wykonano serię rozcieńczeń peptydów Histone H3 zawierających następujące modyfikacje:
Kolumna 1: niezmodyfikowany
Kolumna 2: monometylo-lizyna 36
Kolumna 3: dimetylo-lizyna 36
Kolumna 4: trimetylo-lizyna 36
2 μL każdego rozcieńczenia naniesiono na membranę PVDF i sondowano anty-trimetylo-Histonem H3 (Lys36), (rozcieńczenie 1:1000).
Peptydy były wizualizowane przy użyciu koziego anty-królika drugorzędowego sprzężonego z HRP i systemu detekcji chemiluminescencji (patrz rysunki).

Zestaw ChIPAb+ Trimethyl-Histone H3 (Lys36) -ChIP Validated Antibody & Primer Set zawiera przeciwciało i specyficzne kontrolne startery PCR.

Research Category
Epigenetics & Nuclear Function

Research Sub Category
Histones

Biochem/physiol Actions

Oczekuje się szerokiej reaktywności z innymi gatunkami.

Rozpoznaje trimetylo-histonę H3 (Lys36) o masie cząsteczkowej ~17 kDa.

Packaging

25 testów w zestawie. Zalecane użycie: ~2 μL przeciwciała na immunoprecypitację chromatyny (w zależności od kontekstu biologicznego).

Physical form

Anty-Trimetylo-Histon H3 (Lys36) (królicza monoklonalna IgG). Jedna fiolka zawierająca 50 μL oczyszczonego białka A IgG w roztworze zawierającym 0,07 M Tris-glicyny, 0,105 M NaCl, pH 7,4, 0,035% azydku sodu i 30% glicerolu. Przechowywać w temperaturze -20°C.

Normalne królicze IgG. Jedna fiolka zawierająca 125 µg króliczych IgG w 125 µl buforu do przechowywania zawierającego 0,05% azydku sodu. Przechowywać w temperaturze -20°C.

Primery ChIP, BDNF Intron. Jedna fiolka zawierająca 75 μL po 5 μM każdego primera specyficznego dla ludzkiego intronu BDNF. Przechowywać w temperaturze -20°C.
FOR: ACCCCAACCTCTAACAGCATTA
REV: TGTCTCTCAGCAGTCTTGCATT

Format: Oczyszczony

Protein A purified

Preparation Note

Przechowywać przez 1 rok w temperaturze -20°C od daty otrzymania. Zalecenia dotyczące postępowania: Po pierwszym rozmrożeniu, a przed zdjęciem korka, odwirować fiolkę i delikatnie wymieszać roztwór. Rozdzielić do probówek mikrowirówkowych i przechowywać w temperaturze -20°C. Unikać powtarzających się cykli zamrażania/rozmrażania, które mogą uszkodzić IgG i wpłynąć na działanie produktu. Uwaga: Zmienność temperatur w zamrażarce poniżej -20°C może powodować zamarzanie roztworów zawierających glicerol podczas przechowywania.

Analysis Note

Kontrola
Zawiera królicze przeciwciało IgG kontroli ujemnej i startery specyficzne dla ludzkiego BDNF Intron.

Chromatin Immunoprecipitation:
Sonicated chromatin prepared from HeLa cells (1 X 10⁶ cell equivalents per IP) were subjected to chromatin immuno-precipitation using 2 µg of either Normal Rabbit IgG or 2 µL Anti-trimethyl-Histone H3 (Lys36) and the Magna ChIP^® A Kit (Cat. # 17-610).
Successful immunoprecipitation of trimethyl-Histone H3 (Lys36) associated DNA fragments was verified by qPCR using ChIP Primers, BDNF Intron (Please see figures).
Please refer to the EZ-Magna ChIP A (Cat. # 17-408) or EZ-ChIP (Cat. # 17-371) protocol for experimental details.

Legal Information

MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

Unless otherwise stated in our catalog or other company documentation accompanying the product(s), our products are intended for research use only and are not to be used for any other purpose, which includes but is not limited to, unauthorized commercial uses, in vitro diagnostic uses, ex vivo or in vivo therapeutic uses or any type of consumption or application to humans or animals.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Klasa składowania: 10 - Combustible liquids
• wgk: WGK 2