07-424

Anticorpo anti-fosfo-istone H3 (Thr3)

Upstate^®, from rabbit

• Sinonimo/i: H3T3P, Histone H3 (phospho T3)
• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.41
• eCl@ss: 32160702
• Clone: polyclonal
• Species reactivity: mouse, human
• Application: ICC, WB, inhibition assay
• Citations: 57

Proprietà

• biological source: rabbit
• Quality Segment: 100
• antibody form: unpurified
• antibody product type: primary antibodies
• clone: polyclonal
• species reactivity: mouse, human
• manufacturer/tradename: Upstate^®
• technique(s): immunocytochemistry: suitable, inhibition assay: suitable, western blot: suitable
• NCBI accession no.: NM_003493
• UniProt accession no.: Q16695
• shipped in: dry ice
• target post-translational modification: phosphorylation (pThr3)
• Gene Information: human ... H3C1(8350)

Descrizione

General description

L′istone H3.1t (UniProt: Q16695; chiamato anche H3/t, H3t, H3/g) nell'uomo è codificato dal gene HIST3H3 (chiamato anche H3FT) (Gene ID: 8290). Gli istoni sono proteine basiche nucleari altamente conservate che costituiscono la struttura portante dei nucleosomi nella cromatina degli eucarioti. Per questo hanno un ruolo cruciale nella regolazione della trascrizione, nella riparazione e nella replicazione del DNA così come nella stabilità cromosomica. Due molecole di ciascuno dei quattro istoni (H2A, H2B, H3 e H4) formano un ottamero intorno al quale il DNA si avvolge a formare unità ripetute, chiamate nucleosomi, che limitano l′accessibilità al DNA da parte dell′apparato di trascrizione, che richiede il DNA come stampo. L'istone H3 presenta un dominio globulare principale e una lunga coda N-terminale che fuoriesce dal centro globulare del nucleosoma e può subire diversi tipi di modificazioni epigenetiche che influenzano i processi cellulari. Le code N-terminali delle proteine istoniche sono soggette a modificazioni post-traduzionali, quali fosforilazione, acetilazione e metilazione, che permettono il reclutamento di fattori di regolazione a valle, influenzano la struttura cromatinica e sono decisive nel processo di trascrizione. L'istone H3 può subire acetilazione a opera delle istone-acetiltransferasi su diversi residui di lisina presenti nella sua coda. Solitamente l'acetilazione è associata ad attività trascrizionale, mentre la metilazione dei residui di lisina e arginina può attivare o sopprimere la trascrizione a seconda del residuo modificato. La trimetilazione dell'istone H3 è uno dei segnali epigenetici più studiati. Modificazioni di H3K4me3 risultano concordemente presenti a livello dei siti di inizio della trascrizione e il dominio H3K4me3 è associato a una maggiore attività di trascrizione e all′identità cellulare nello sviluppo preimpianto e nel processo di derivazione delle cellule staminali embrionali dalla massa cellulare interna e dalle cellule staminali ottenute dal trofoectoderma. L'istone H3 viene fosforilato sulla treonina 3 (H3T3ph) dalla protein-chinasi associata all'istone H3 (HASPIN) durante la profase e viene defosforilato durante l'anafase. La fosforilazione sulla serina 11 (H3S10ph) da parte della Aurora chinasi B è indispensabile per la condensazione dei cromosomi e la progressione nel ciclo cellulare durante la mitosi e la meiosi. (Rif.: Sharifi-Zarchi, A., et al. (2017). BMS Genomics. 18; Article 964; Liu, X., et al. (2016). Nature. 537(7621); 558-562).

Visualizzato a ~17 kDa; calcolato a 15,51 kDa. In alcuni lisati possono essere osservate bande non caratterizzate.

Immunogen

Peptide lineare, coniugato con KLH, corrispondente a 13 amminoacidi intorno alla fosfotreonina 3 dell′istone H3 umano.

Application

Test per il controllo qualità

Valutata mediante Western Blotting su estratto acido di cellule HeLa trattate con colcemide.Western blotting: questo anticorpo diluito 1:5.000 ha permesso di rivelare il fosfo-istone H3 (Thr3) in estratto acido di cellule HeLa trattate con colcemide (50 ng/mL, per tutta la notte), ma non l'istone H3 ricombinante.


Applicazioni testateSaggio di inibizione con peptide: la rivelazione della banda di interesse nell'estratto acido di cellule HeLa trattate con colcemide (50 ng/mL, per tutta la notte) veniva impedita bloccando preliminarmente un lotto rappresentativo con il fosfopeptide immunogeno, ma non con l'istone H3 non fosforilato. Saggio immunocitochimico: un lotto rappresentativo alla diluizione 1:1500 ha riscontrato la presenza del fosfo-istone H3 (Thr3) in cellule NIH3T3. Nota: Le effettive diluizioni di lavoro ottimali vanno determinate dall′operatore poiché sia i campioni che le condizioni sperimentali possono variare.

Biochem/physiol Actions

Questo anticorpo policlonale di coniglio rivela l′istone H3 fosforilato in treonina 3.

Physical form

Formato: non purificato

Immunodepleto

Siero di coniglio immunodepleto contenente azoturo di sodio 0,05% e glicerolo 30%.

Preparation Note

Conservare a una temperatura compresa tra -10°C e -25°C. Raccomandazioni per la manipolazione: una volta ricevuto il prodotto, prima di rimuovere il tappo, centrifugare il flaconcino e mescolare delicatamente la soluzione. Suddividere in aliquote in provette da microcentrifuga e conservare a -20°C. Evitare ripetuti cicli di congelamento e scongelamento che potrebbero danneggiare le IgG e compromettere le prestazioni del prodotto.

Analysis Note

Controllo
Estratto acido ottenuto da cellule HeLa trattate con colcemide

Valutata di routine mediante immunoblotting su proteine estratte con acido di cellule HeLa mitotiche.

Legal Information

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

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Informazioni sulla sicurezza

• Classe di stoccaggio: 12 - Non Combustible Liquids
• wgk: WGK 1
• flash_point_f: Not applicable
• flash_point_c: Not applicable