Clonaggio & espressione di proteine
Lo scopo del clonaggio è quello di inserire un gene di interesse (GOI) in un vettore plasmidico, cioè un pezzo di DNA circolare che contiene tutti gli elementi necessari per facilitare il clonaggio, la selezione dei cloni e l'espressione delle proteine. I ricercatori spesso utilizzano enzimi di restrizione e ligasi per inserire il GOI in-frame all'interno del vettore di espressione per la successiva espressione della proteina. Il vettore viene quindi inserito in una cellula che esprimerà la proteina codificata dal GOI o, in alternativa, la proteina verrà espressa in un sistema cell-free.
Una volta che la proteina è espressa, è possibile analizzarne la funzione in termini di effetti sul signaling cellulare, sulla morfologia o su altri aspetti della biologia della cellula. In alternativa, la proteina può essere espressa in grandi quantità, purificata e utilizzata in numerose tipologie di applicazioni. Per ulteriori informazioni, esplora la nostra vasta offerta di reagenti e risorse disponibili per i processi di clonaggio e di espressione in sistemi di espressione quali cellule batteriche, di insetto o di mammifero.
Scopri di più su
- Enzimi di restrizione e che modificano il DNA
- Sistemi di espressione cell-free e vettori di espressione che utilizzano i promotori del CMV e la tecnologia del tag FLAG®
- Sistema Novagen® pET, vettori SnapFast™, vettori Simplicon™ e sistemi per l'espressione di proteine UCOE™
- Reagenti e risorse per la trasformazione dei batteri e dei lieviti
Risorse sui prodotti
- Article: Cell-Free Protein Synthesis or Expression
A form of synthetic biology, cell-free protein synthesis or expression (CFPE) is a rapid method to produce recombinant proteins in solution without involving cells. Using biomolecular translation machinery extracted from a range of different cell types, researchers can express a protein of interest within a day.
- Article: Competent Cell Selection & E. coli Markers Guide
Select competent cells by application, transformation efficiency, and genotype. We also present a list of E. coli markers for reference.
- Article: Simplicon™ in vivo Protein Expression System
Simplicon: A non-genome integrating, tunable and sustained protein expression system in human cells, based on a single, polycistronic, and self-replicating synthetic RNA.
- Brochure: Genomics
Streamline your molecular biology workflow.
Enzimi di restrizione e che modificano il DNA
Nei clonaggi i ricercatori utilizzano spesso due tipologie di enzimi: gli enzimi di restrizione, per tagliare il DNA e gli enzimi di modificazione, che sono usati per apportare modifiche agli acidi nucleici, spesso prima della ligazione. Esplora la nostra vasta gamma di enzimi di restrizione e di modificazione, come fosfatasi alcalina, proteasi, T7 RNA polimerasi, ribonucleasi A e T4 DNA ligasi per tutte le tue esigenze di ricerca.
Sistemi di espressione cell-free e vettori di espressione che utilizzano i promotori del CMV e la tecnologia del tag FLAG®
Il nostro portafoglio dedicato ai clonaggi e all’espressione rende l'ingegneria genetica più economica ed efficiente, grazie ad una collezione di vettori versatili, con protocolli semplificati e kit di clonaggio. Scegli dalla nostra vasta gamma di sistemi di clonaggio ed espressione, incluso il nostro sistema cell free per la sintesi o espressione di proteine, come il kit per l’espressione di proteine Next Generation Cell-Free (germe di grano) (N° Cat. CFPS700) e il kit ALiCE® (N° Cat. AL0103000). Scopri inoltre i vettori di espressione FLAG® per cellule batteriche e di mammifero, per l'espressione periplasmatica o citoplasmatica in sistemi di transfezione transiente o stabile ed esprimi la tua sequenza FLAG® o FLAG® 3X all’estremità N- o C-terminale, con un sito di taglio per l’enterochinasi (Ek) per la rimozione del tag se necessaria.
Sistema Novagen® pET, vettori SnapFast™, vettori Simplicon™ e sistemi per l’espressione di proteine UCOE™.
Tutti i vettori di espressione per E. coli ed i vettori di espressione per cellule di insetto conferiscono la resistenza all'ampicillina, per una facile selezione dei trasformanti. Scopri il sistema Novagen® pET, lo standard di riferimento per il clonaggio e l'espressione di proteine ricombinanti nei batteri. Progettata da Oxford Genetics, la famiglia di vettori SnapFast™ offre un protocollo rapido e semplice che consente il trasferimento di un GOI da un vettore ad un altro, utilizzando i siti di taglio SnapFast™, generando vettori compatibili con diversi sistemi di espressione inclusi batteri e cellule di insetto, lievito e mammifero. Grazie al nostro vettore di espressione Ubiquitous Chromatin Opening Element (UCOE™) è possibile ottenere quantità di proteine nell’ordine dei grammi in meno di 30 giorni, usando cellule di mammifero transfettate in modo stabile. La tecnologia UCOE™ impedisce il silenziamento del transgene e consente un’espressione genica riproducibile, stabile e fino a 20 volte superiore rispetto a quella ottenuta coi vettori convenzionali, indipendentemente dal sito di integrazione nel cromosoma. Il sistema di espressione di proteine in vivo Simplicon™ consiste in un sistema di espressione regolabile e autoreplicante basato su RNA sintetico, che non si integra nel DNA e fornisce l’espressione immediata e prolungata di più geni nelle cellule umane transfettate, senza i rischi associati all’integrazione nel genoma. Per ulteriori informazioni, consultare il nostro video sulla tecnologia Simplicon™ per un'efficiente generazione di iPSC umane.
Reagenti e risorse per la trasformazione dei batteri e dei lieviti
La trasformazione batterica consiste in un processo di inserimento di DNA estraneo nei batteri che utilizza metodi come lo shock termico e l'elettroporazione. Il nostro portafoglio di cellule competenti è progettato per un'espressione proteica ottimale anche per le proteinericombinanti più impegnative. Sfoglia la nostra guida alla selezione delle cellule competenti per scegliere tra una varietà di nuove cellule batteriche competenti per un'ampia varietà di applicazioni, tra cui l'espressione proteica, i clonaggi di routine o difficoltosi e la generazione di librerie. L'espressione di proteine ricombinanti in Saccharomyces cerevisiae presenta molti vantaggi, quali l’uso di protocolli semplici e reagenti di base oltre alla scalabilità. Esplora i numerosi prodotti disponibili per la trasformazione del lievito come parte del flusso di lavoro di espressione delle proteine. Le nostre cellule competenti NovaBlue®, ottimizzate per l’efficienza di transfezione e per l’elevata capacità di conservazione del plasmide, consentono la preparazioni di librerie e assicurano la stabilità del plasmide. Ancora, le cellule competenti Novagen® sono progettate per facilitare il corretto ripiegamento delle proteine, la loro maggiore solubilità o per l’espressione di proteine citotossiche. I marchi più popolari sono i sistemi Rosetta™, Origami™ e Overnight Express™
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