Kit per l'isolamento di cellule

Sebbene lo studio delle cellule derivate da tessuti in vivo sia più predittivo circa la biologia e la funzione cellulare, la complessità biologica può mascherare i risultati, a meno che le popolazioni di cellule di interesse non vengano isolate. Per potere studiare i fenotipi delle cellule sono state messe a punto delle metodiche per isolare le diverse popolazioni cellulari in base a specifiche caratteristiche. L'isolamento delle popolazioni cellulari è utile non solo per la ricerca biologica, ma anche per facilitare i test diagnostici clinici. I metodi di isolamento più efficaci sono quelli che assicurano maggiore resa, purezza e vitalità delle cellule. L'arricchimento o la purificazione delle popolazioni target può essere ottenuto mediante selezione positiva, spesso impiegando anticorpi che legano specifici marcatori cellulari, o mediante selezione negativa, che utilizza determinate proprietà biofisiche per eliminare le cellule indesiderate al fine di arricchire la popolazione target.    

Il frazionamento delle cellule nei loro componenti subcellulari si è rivelato fondamentale per studi di biologia cellulare. Le tecniche di frazionamento subcellulare sono state ampiamente utilizzate per studiare la struttura e la funzione degli organelli e dei compartimenti subcellulari, nonché per comprendere la localizzazione, il processamento e il traffico delle biomolecole. L'obiettivo della maggior parte delle tecniche di frazionamento è quello di ottenere organelli e macromolecole cellulari in uno stato funzionale, nel quale conservano le proprietà biochimiche intrinseche. In genere si effettua una lisi cellulare con mezzi meccanici o detergenti delicati, seguita dal frazionamento dei vari componenti cellulari mediante centrifugazione differenziale. 

Isolamento delle cellule in base al fenotipo

I preadipociti possono essere utilizzati per studiare il processo di adipogenesi e, dopo il differenziamento, per valutare la lipolisi, la trasduzione del segnale, la funzione endocrina e l'attività metabolica.

Il nostro kit di isolamento dei preadipociti combina gli strumenti e i reagenti necessari per isolare la frazione di cellule vascolari stromali dal tessuto adiposo. La frazione vascolare stromale risultante viene coltivata su di una piastra di coltura, su cui aderiscono i preadipociti. I preadipociti trattati con composti che inducono la differenziazione mantengono la capacità di proliferare e differenziarsi in adipociti.

Isolamento di organelli e complessi subcellulari

L’isolamento dei componenti subcellulari facilita la comprensione della funzione degli organelli e può portare a nuovi approcci nelle biotecnologie. Ad esempio, nuclei isolati da cellule di mammifero possono essere utilizzati per la sintesi di trascritti primari di RNA endogeno. Il kit Nuclei EZ Prep ad alto rendimento (NUC101, NUC201) è stato sviluppato per l'isolamento rapido dei nuclei dalla maggior parte delle cellule di mammifero.

Il nostro kit di colorazione mitocondriale per il rilevamento dell'integrità mitocondriale e del potenziale di membrana(CS0390, CS0760) usa il colorante JC-1 (420200, T4069),che si concentra nella matrice mitocondriale a formare degli aggregati fluorescenti rossi. Eventi come l'apoptosi che dissipano il potenziale della membrana mitocondriale impediscono l'accumulo del colorante JC-1 nei mitocondri ed è quindi possibile distinguere i mitocondri vitali da quelli danneggiati mediante un microscopio a fluorescenza.

Anche alcuni complessi subcellulari non costituiti da organelli, come il proteosoma, possono essere isolati per l'uso in saggi proteolitici. Il nostro metodo utilizza microsfere con una matrice di affinità contenente una proteina di fusione GST con un dominio ubiquitina-simile legato a GST-agarosio. 

Arricchimento del citoscheletro

Lavorare con le proteine che si associano al citoscheletro di actina si è dimostrato complicato a causa dell'insolubilità degli elementi del citoscheletro nei detergenti come il Triton X-100. Il kit Millipore ProteoExtract^® kit di arricchimento e isolamento del citoscheletro fornisce tamponi per la purificazione del citoscheletro che rimuovono le proteine solubili citoplasmatiche e nucleari, conservando invece le adesioni focali e le proteine associate all’actina. Questo approccio migliora la capacità di rilevare e studiare le proteine associate all'actina poco abbondanti, che sono difficili da rilevare tramite le comuni analisi di Western blotting su lisato cellulare totale.