Reagenti di dissociazione cellulare
Per riprodurre il loro ambiente naturale, i fenotipi cellulari che crescono adesi (come le cellule epiteliali, ad esempio) solitamente sono seminati su superfici trattate per colture tissutali, alle quali aderiscono per sopravvivere e proliferare. Per la propagazione, la conta ed eventuali analisi successive, le cellule adese e quelle ottenute da tessuti solidi devono essere disaggregate in modo da ottenere delle sospensioni. Spesso per la conta cellulare, la suddivisione in sottocolture e per le analisi o i saggi è necessario disporre di sospensioni di cellule singole.
I reagenti di dissociazione possono contenere enzimi presenti in natura o alternative non enzimatiche meno aggressive. Il meccanismo d'azione di questi reagenti è basato sulla chelazione del calcio per impedire che le caderine si attacchino alla superficie di crescita o le une alle altre, determinando così il distacco delle cellule durante la loro coltura. I reagenti di dissociazione impiegati nel normale flusso di lavoro con le colture cellulari sono anche disponibili in formulazioni specifiche per i substrati della matrice extracellulare (ECM).
La nostra gamma completa di reagenti di dissociazione cellulare comprende:
Tripsina, tripsina ricombinante, tripsina StableCell™
La tripsina è una serin proteasi e uno degli enzimi più comunemente utilizzati per il distacco di linee cellulari adese e per la dissociazione dei tessuti. Generalmente le preparazioni di tripsina si sono rivelate molto efficaci in entrambe queste applicazioni, ma incubare le cellule con concentrazioni elevate di tripsina o per tempi prolungati rischia di danneggiarne le membrane e addirittura di ucciderle. Di norma, le cellule in coltura sono rimosse dal proprio substrato utilizzando la tripsina in combinazione con l’EDTA (acido etilendiamminotetraacetico); la concentrazione di tripsina può variare dallo 0,025% allo 0,5%.
Le soluzioni di tripsina StableCell™ agiscono distaccando le cellule proprio come le soluzioni standard di tripsina, ma evitano di aliquotare, congelare e scongelare l’enzima. Si risparmia così molto tempo, non dovendo attendere lo scongelamento dell’enzima prima di utilizzarlo per dividere le cellule o per gli esperimenti. Consente, inoltre, di liberare spazio prezioso nei congelatori. Si raccomanda di conservare le soluzioni di tripsina StableCell™ a una temperatura di 2-8 °C, anche se i nostri studi hanno evidenziato come questo prodotto mantenga attività e prestazioni superiori al 90% anche quando viene conservato a 37 °C.
Collagenasi e dispasi
La collagenasi scinde i legami peptidici del collagene nativo a tripla elica. Vista la sua capacità esclusiva di idrolizzare il collagene nativo, è ampiamente utilizzata per separare le cellule dai tessuti animali. Le collagenasi sono presenti in numerosi microrganismi e in molte cellule animali. La più potente è la collagenasi secreta dal batterio anaerobio Clostridium histolyticum.
Le dispasi sono proteasi neutre ad azione rapida, efficaci e non aggressive, in grado di separare dal substrato foglietti epiteliali intatti in coltura. La dispasi I è stata utilizzata per digerire il tessuto polmonare e per lo staining delle cellule per la citometria a flusso, oltre che per isolare i linfociti T CD4 di topo.
Reagenti di dissociazione per colture particolari
Per dissociare o staccare cellule e tessuti che richiedono un’attività enzimatica meno aggressiva, le soluzioni Accutase® e Accumax™ si avvalgono di enzimi efficaci a concentrazioni inferiori. Queste soluzioni:
- staccano in modo efficiente cellule staminali embrionali e neuronali
- agiscono con delicatezza per preservare la vitalità delle cellule e possono incrementare la resa cellulare
- non richiedono neutralizzazione
Analisi di singole cellule
L'analisi di singole cellule richiede che le cellule siano vitali quando ottenute da campioni di tessuto. Questo tipo di analisi permette di studiare variazioni all'interno di popolazioni di cellule in coltura e trova applicazione nella ricerca sulle cellule staminali, nel cancro e in immunologia. Scoprite i nostri reagenti di dissociazione di alta qualità, essenziali per ottimizzare i protocolli e creare le migliori pratiche, a garanzia dell'affidabilità dei dati ottenuti dall'analisi di singole cellule.
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