This material may be reconstituted in 1X PBS without Calcium and Magnesium. However, when this product is prepared as recommended, in 50 mM HEPES/KOH (pH 7.4) with 150 mM NaCl to 10 mg/mL, or in 10 mM sodium acetate (pH 7.5) with 5 mM calcium acetate, solutions are expected to be stable for 2 weeks at 2-8°C and up to 2 months when stored in aliquots at -20°C. Solution stability in PBS has not been evaluated. Various sources indicate solutions diluted in PBS are stable for approximately 3 days at 2–8 °C.
D4693
Dispase® II
protease
Sinonimo/i:
Proteasi
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| Taglio della confezione | SKU | Disponibilità | Prezzo |
|---|---|---|---|
| 1 g | Per informazioni sulla disponibilità, contatta il Servizio Clienti. | 249,00 € |
Informazioni su questo articolo
Specific activity:
≥0.5 units/mg solid
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Permettici di aiutartiQuality Segment
form
lyophilized solid
specific activity
≥0.5 units/mg solid
technique(s)
cell culture | mammalian: suitable, single cell analysis: suitable
solubility
10 mM NaAc (pH 7.5) and 5 mM CaAc: soluble
storage temp.
2-8°C
Application
L′enzima Sigma è stato utilizzato nello sviluppo di un protocollo per la coltura ex vivo di gemme mammarie embrionali murine.[1] È stato adoperato nel trattamento di sezioni di cuore di ratto durante l′isolamento dei mitocondri del cuore di ratto.[2] Viene inoltre utilizzato per l′isolamento delle cellule staminali della polpa dentale (DPSC) mediante idrolisi enzimatica. [3]
®[4] [5]
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Biochem/physiol Actions
Dispase® II è una proteasi neutra che idrolizza i legami dei peptidi N-terminali dei residui di amminoacidi non polari. Può essere utilizzata per separare molti tessuti e cellule cresciuti in vitro. È un enzima molto delicato che non danneggia le membrane cellulari. Può anche essere usata per prevenire l′aggregazione nelle colture in sospensione. Questa proteasi scinde la fibronectina e il collagene di tipo IV, ma non la laminina, il collagene di tipo V, l′albumina sierica e la transferrina.[6] Dispase® II è destinata specificamente alla scissione dei legami leucina-fenilalanina. Ca2+, Mg2+, Mn2+, Fe2+, Fe3+ e Al3+ attivano l′enzima. EDTA, EGTA, Hg2+ e altri metalli pesanti inibiscono l′attività enzimatica.[7] L′enzima contiene 1 g-atomo di zinco per g-mole di enzima purificato. Se questo componente di zinco viene rimosso da agenti chelanti quali EDTA o EGTA, si ottiene un apoenzima inattivo. L′enzima non è inibito dal siero.
Physical form
polvere liofilizzata contenente acetato di calcio e zucchero di latte
Preparation Note
Si può preparare una soluzione madre di 50 U/mL sciogliendo la polvere in un tampone contenente 10 mM di NaAc (pH 7,5) e 5 mM di CaAc. La soluzione va conservata a 4 °C.
Analysis Note
L′enzima può essere sciolto inizialmente in 50 mM di Hepes/KOH a pH 7,4, 150 mM di NaCl a 10 mg/ml. Ulteriori diluizioni devono essere eseguite nei terreni di coltura cellulare più idonei alle cellule da dissociare. La dispasi è una metalloproteasi e viene attivata dai cationi bivalenti, tra cui Ca2+ , Mg2+, Mn2+ e Fe2+.
Other Notes
Un′unità idrolizza la caseina per produrre colore equivalente a 1,0 μmole (181 μg) di tirosina in un minuto a pH 7,5 a 37 °C (colore da reagente di Folin-Ciocalteu), salvo diversamente indicato.
Legal Information
Dispase is a registered trademark of Godo Shusei Co., Ltd.
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|---|---|---|---|
| technique(s) cell culture | mammalian: suitable, single cell analysis: suitable | technique(s) cell culture | mammalian: suitable, single cell analysis: suitable | technique(s) cell culture | mammalian: suitable | technique(s) cell culture | mammalian: suitable, single cell analysis: suitable |
| specific activity ≥0.5 units/mg solid | specific activity ≥10 unit/mg solid | specific activity ≥9,000 BAEE units/mg protein | specific activity ≥125 CDU/mg solid, 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid |
| form lyophilized solid | form lyophilized solid | form essentially salt-free, lyophilized powder | form essentially salt-free, lyophilized powder |
| solubility 10 mM NaAc (pH 7.5) and 5 mM CaAc: soluble | solubility - | solubility hydrochloric acid: soluble 1 mM | solubility TESCA buffer (50 mM TES, 0.36 mM Calcium chloride, pH 7.4): soluble |
| storage temp. 2-8°C | storage temp. 2-8°C | storage temp. −20°C | storage temp. −20°C |
| Quality Level 100 | Quality Level 200 | Quality Level 200 | Quality Level 200 |
signalword
Danger
hcodes
Hazard Classifications
Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
target_organs
Respiratory system
Classe di stoccaggio
11 - Combustible Solids
flash_point_f
Not applicable
flash_point_c
Not applicable
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Numero articolo commerciale globale
| SKU | GTIN |
|---|---|
| D4693-1G | 04061833574041 |
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Can I also dissolve the powder in 1x PBS?
1 risposta-
Utile?
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Can I aliquot in 10 mM sodium acetate (pH 7.5) + 5 mM calcium acetate, freeze once, and thaw as needed? I need small amounts from the same lot over several months, therefore I cannot store it at 2-8°degrees for only 2 weeks,
1 risposta-
Aliquots of this product prepared in 10 mM sodium acetate (pH 7.5) + 5 mM calcium acetate can be stored at -20 °C, where stability is known for up to 2 months.
Utile?
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How long can I store the powder at -80°C?
1 risposta-
In powder form, this product is quite stable and stored at 2-8°C. This product is not assigned an expiration or retest date. A warranty period of 1 year from the date of shipment applies. The long term stability of this material when stored at -20°C or -80°C has not been investigated. Prepared solutions are expected to be stable for 2 weeks at 2-8°C and up to 2 months when stored in aliquots at -20°C.
Utile?
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Could I dissolve in another work solution instead Hepes/KOH 50 mM pH 7,4, NaCl 150 mM?
1 risposta-
Two approaches are available for reconstituting this lyophilized enzyme formulation. The first approach is for making a solution used in cell dissociation, and the second is a more generic method, such as for assaying Dispase activity:
1. Dissolve in 50 mM Hepes/KOH pH 7.4, 150 mM NaCl at 10 mg/mL. Further dilutions should be made in the cell culture media most appropriate for the cells being dissociated.
2. A 50 U/mL stock solution may be prepared by dissolving the powder in a buffer containing 10 mM sodium acetate (pH 7.5) and 5 mM calcium acetate.
Utile?
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how many units in 1 mg for the product D4693
1 risposta-
The enzymatic activity varies from lot to lot and is reported in the Certificate of Analysis. A brief survey of recent lots reveals an average activity of 1.2 u/mg solid. Please see the link below to review a sample or lot specific Certificate:
https://www.sigmaaldrich.com/product/sigma/d4693*product-documentationUtile?
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Once dissolved into a stock solution, how long is it stable at 4 degrees C?
1 risposta-
The reconstituted stock solution can be stored at 2 to 8 °C for 2 weeks. Alternatively, it can be stored at - 20 deg C in aliquots to minimize freeze-thaw cycles where it should be stable for up to 2 months. The working solution, diluted in PBS from the stock solution, is stable for approximately 3 days at 2 to 8 °C.
Utile?
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Is Dispase II esteril for isolating cells from tissues for doing cell cultures? Thanks Monica
1 risposta-
This product has been used in the ex vivo culture of mouse embryonic mammary buds. Please see protocols in the published article: https://link.springer.com/article/10.1007/s10911-013-9288-2
Utile?
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What is the Department of Transportation shipping information for this product?
1 risposta-
Transportation information can be found in Section 14 of the product's (M)SDS.To access the shipping information for this material, use the link on the product detail page for the product.
Utile?
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