APT409

Kit CaspaTag per saggio della caspasi-9 in situ, fluoresceina

The CaspaTag Caspase-9 In Situ Assay Kit, Fluorescein for flow cytometry is a fluorescent-based assay for detection of active caspase-9 in cells undergoing apoptosis.

• UNSPSC Code: 12161503
• NACRES: NA.54
• eCl@ss: 32161000

Proprietà

• Quality Segment: 100
• species reactivity (predicted by homology): mammals
• manufacturer/tradename: CaspaTag, Chemicon^®
• technique(s): activity assay: suitable, flow cytometry: suitable
• NCBI accession no.: NM_001080124.1, NM_001080125.1, NM_001228.4, NM_033355.3, NM_033356.3, NM_033358.3
• UniProt accession no.: Q14790
• detection method: fluorometric
• shipped in: wet ice

Descrizione

General description

L′apoptosi è una forma di suicidio cellulare che si compie attraverso l′attivazione di uno specifico programma cellulare evolutivamente ben conservato. Il fulcro di questo programma è rappresentato da una cascata di enzimi proteolitici chiamati caspasi, che intervengono in una serie di reazioni attivate in risposta a segnali pro-apoptotici che si esplicano attraverso la scissione di substrati proteici, causando la demolizione della cellula.1

Le caspasi sono state identificate in organismi molto diversi, da C. elegans all′uomo. Nei mammiferi, le caspasi sono implicate nei processi di apoptosi e infiammazione con funzioni distinte. Nell′apoptosi, le caspasi effettuano le scissioni proteolitiche che portano alla demolizione della cellule (caspasi effettrici) e intervengono negli eventi di regolazione a monte (caspasi iniziatrici). Una caspasi attiva è composta da due subunità grandi e piccole che formano due eterodimeri che si associano in un tetramero.2-4 Come nel caso delle altre proteasi, le caspasi sono sintetizzate sotto forma di precursori che subiscono maturazione proteolitica, in maniera autocatalitica oppure attraverso una cascata mediata da enzimi a specificità simile.5

Gli enzimi caspasi riconoscono specificamente una sequenza di 4 o 5 amminoacidi sul substrato bersaglio, tra i quali deve essere necessariamente presente un residuo di acido aspartico. Questo residuo è il bersaglio della scissione, che avviene all′estremità carbonilica dell′acido.6 Le caspasi sono rivelabili mediante tecniche di immunoprecipitazione e immunoblotting ricorrendo ad anticorpi caspasi-specifici oppure a substrati fluorocromici, che emettono fluorescenza a seguito della scissione a opera della caspasi.

Application

Categoria di ricerca
Apoptosi & cancro

Il kit CaspaTag Caspase-9 In Situ Assay Kit, Fluorescein per citometria a flusso è un saggio basato sulla fluorescenza per la rivelazione della caspasi-9 attiva nelle cellule che stanno andando incontro ad apoptosi.

Il kit CaspaTag Caspase-9 In Situ Assay, Fluorescein di CHEMICON^® è un saggio basato sulla fluorescenza per la rivelazione della caspasi-9 attiva nelle cellule che stanno andando incontro ad apoptosi. Kit destinato esclusivamente a scopi di ricerca. Non usare a scopo diagnostico o terapeutico.

Principio del test

Il kit CaspaTag Caspase-9 In Situ Assay di CHEMICON si avvale di un nuovo approccio per evidenziare le caspasi attive. La metodologia si basa su fluorocromi inibitori delle caspasi (FLICA), caratterizzati da permeabilità cellulare e non citotossici. Una volta entrati nella cellula, si legano covalentemente alle caspasi attive.7 Il kit si basa su un inibitore peptidico della caspasi 9 costituito da fluorometil-chetone marcato con carbossifluoresceina (FAM-LEHD-FMK) che produce una fluorescenza verde. Quando aggiunta a una popolazione di cellule, la sonda FAM-LEHD-FMK entra in tutte le cellule e si lega covalentemente a un residuo di cisteina reattivo situato sulla subunità grande dell′eterodimero della caspasi attiva, inibendone così l′attività enzimatica. Il reagente marcato legato rimane all′interno della cellula, mentre tutto quello che non si è legato esce dalla cellula per diffusione e viene lavato via. Il segnale fluorescente verde è direttamente proporzionale alla quantità di caspasi 9 attiva presente nella cellula al momento dell′aggiunta del reagente. Le cellule che contengono il reagente marcato legato possono essere analizzate mediante fluorimetria basata su piastre a 96 pozzetti, microscopia in fluorescenza o citometria a flusso.

Preparation Note

· Conservare i materiali del kit non aperti a 2-8°C fino alla rispettiva data di scadenza.

· Il reagente FLICA ricostituito (150X) deve essere mantenuto in congelatore a -20°C per un periodo massimo di 6 mesi, durante il quale può essere scongelato due volte. Se desiderato, aliquotare in più provette ambrate. Tenere sempre al riparo dalla luce.

· Il tampone di lavaggio diluito (1X) va conservato a -20 °C per 2 settimane.

Other Notes

Reagente FLICA (FAM-LEHD-FMK): quattro provette liofilizzate

Tampone di lavaggio 10X: 60 mL

Fissativo: 6 mL

Ioduro di propidio: 1 mL a 250 μg/mL, pronto per l′uso

Colorante Hoechst: 1 mL alla concentrazione di 200 μg/mL, pronto per l′uso

Legal Information

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

Salvo diversa indicazione nel nostro catalogo o in altra documentazione fornita dall′azienda insieme al prodotto, i nostri prodotti sono destinati esclusivamente a scopi di ricerca e non devono essere utilizzati per altre finalità, inclusi a titolo esemplificativo ma non esaustivo, fini commerciali non autorizzati, applicazioni diagnostiche in vitro, usi terapeutici ex vivo o in vivo o qualsiasi altro tipo di assunzione o applicazione rivolta agli esseri umani o agli animali.

Informazioni sulla sicurezza

• pictograms: GHS06,GHS08
• signalword: Danger
• hcodes: H302 + H312,H315,H317,H319,H331,H335,H341,H350,H371
• pcodes: P280 - P301 + P312 - P302 + P352 + P312 - P304 + P340 + P311 - P305 + P351 + P338 - P308 + P311
• Hazard Classifications: Acute Tox. 3 Inhalation - Acute Tox. 4 Dermal - Acute Tox. 4 Oral - Carc. 1B - Eye Irrit. 2 - Muta. 2 - Skin Irrit. 2 - Skin Sens. 1 - STOT SE 2 - STOT SE 3
• target_organs: Eyes,Central nervous system, Respiratory system
• Classe di stoccaggio: 6.1C - Combustible acute toxic Cat.3 / toxic compounds or compounds which causing chronic effects