C7657

Collagenasi

Type XI, 2-5 FALGPA units/mg solid, ≥800 CDU/mg solid

• Sinonimo/i: Clostridiopeptidasi A
• Numero CAS: 9001-12-1
• Classificazione EC (Enzyme Commission): 3.4.24.3 (BRENDA, IUBMB)
• Numero CE: 232-582-9
• Numero MDL: MFCD00130830
• Codice UNSPSC: 12352204
• NACRES: NA.54

Proprietà

• Origine biologica: Clostridium histolyticum
• Livello qualitativo: 200
• Forma fisica: powder
• Attività specifica: ≥800 CDU/mg solid; 2-5 FALGPA units/mg solid
• PM: 68-130 kDa
• Solubilità: TESCA buffer (50 mM TES, 0.36 mM Calcium chloride, pH 7.4): soluble 0.05-0.1 mg/mL at 37 °C
• applicazioni: diagnostic assay manufacturing
• Temperatura di conservazione: −20°C

Descrizione

Applicazioni

La clostridiopeptidasi A è stata usata anche in uno studio che descrive un metodo quantitativo per valutare piccole quantità di collagene mediante spettrometria di massa (MS) MALDI-TOF (con ionizzazione per desorbimento laser assistita da matrice con analizzatore a tempo di volo) successivamente alla digestione del collagene.

Questo prodotto è stato usato nell′isolamento di linee cellulari di adenocarcinoma duttale pancreatico (PDAC) e di colture tissutali di fibroblasti pancreatici.

Azioni biochim/fisiol

L′effettivo rilascio di cellule dal tessuto richiede l′azione di collagenasi e della proteasi neutra. La collagenasi è attivata da quattro grammi-atomo di calcio (Ca²⁺) per mole di enzima. Si ritiene che il filtrato della coltura contenga almeno 7 diverse proteasi con pesi molecolari compresi fra 68 e 130 kDa. Il pH ottimale è fra 6,3 e 8,8. L′enzima è normalmente usato per digerire i componenti di connettivo nei campioni di tessuto e liberare le singole cellule. Il trattamento con collagenasi può indurre la morte di qualche cellula. Per la digestione si usano tipicamente concentrazioni comprese fra 0,1 e 5 mg/mL. La durata della reazione varia da 15 minuti a parecchie ore per ottenere una efficienza soddisfacente nella dissociazione delle cellule senza causare un′eccessiva mortalità cellulare. È preferibile il tampone Krebs Ringer con calcio e BSA e lo Zn²⁺ è necessario per l′attivazione.

La collagenasi è attivata da quattro grammi atomo di calcio per mole di enzima. È inibita da etilen-glicol-bis(beta-amminoetil etere) - acido N, N, N′,N′-tetraacetico, beta-mercaptoetanolo, glutatione, acido tioglicolico e 8-idrossichinolina.

Qualità

Contiene anche clostripaina, una proteasi neutra non specifica e attività triptiche.

Definizione di unità

Una unità di digestione del collagene (CDU) libera peptidi da collagene proveniente da tendine d′Achille bovino equivalente in colore ninidrina a 1,0 μmole di leucina in 5 ore a pH 7,4 a 37 °C in presenza di ioni calcio. Una unità di idrolisi FALGPA idrolizza 1,0 μmole di furilacriloil-Leu-Gly-Pro-Ala per minuto a 25 °C. Una unità di proteasi neutra idrolizza caseina e produce colore equivalente a 1,0 μmole di tirosina per 5 ore a pH 7,5 a 37 °C. Una unità di clostripaina idrolizza 1,0 μmole of BAEE per minuto a pH 7,6 a 25 °C in presenza di DTT.

Nota sulla preparazione

Si può preparare una soluzione madre dissolvendo 0,05-0,1 mg/mL di collagenasi in 50 mM di tampone TES contenente 0,36 mM di cloruro di calcio (TESCA), pH 7,4, a 37 °C.

Informazioni sulla sicurezza

• Pittogrammi: GHS08,GHS07
• Avvertenze: Danger
• Indicazioni di pericolo: H315,H319,H334,H335
• Consigli di prudenza: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Classi di pericolo: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Organi bersaglio: Respiratory system
• Codice della classe di stoccaggio: 11 - Combustible Solids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): WGK 1
• Punto d’infiammabilità (°F): Not applicable
• Punto d’infiammabilità (°C): Not applicable
• Dispositivi di protezione individuale: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves