Risoluzione dei problemi nelle colture cellulari

Errata identificazione delle linee cellulari

Studi recenti stimano che un'identificazione errata può riguardare fino a un terzo di tutte le linee cellulari in uso. Questi studi possono mettere in discussione i risultati pubblicati sui sistemi biologici basati sull’uso di linee cellulari come sistema modello. I fattori che portano all'errata identificazione/contaminazione crociata delle linee cellulari includono:

• contaminazione con linee cellulari aggressive: l'analisi degli isoenzimi ha dimostrato che molte linee cellulari condividono una rara isoforma enzimatica con le cellule HeLa. Da allora è stato dimostrato che la linea HeLa è la linea contaminante più comune negli stock di coltura;
• documentazione e procedure di etichettatura: fiasche per colture cellulari, piastre, contenitori criogenici e freezer devono essere chiaramente etichettati e le mappe di stoccaggio in azoto liquido devono essere rigorosamente aggiornate, tenendo conto delle aggiunte, dei prelievi e del trasferimento di stock cellulari;
• prestito della linea cellulare: la condivisione delle cellule tra laboratori vicini è una pratica comune che può portare ad errori nell'identità delle linee cellulari. Le linee cellulari dovrebbero essere conferite solo da banche attendibili quali l’European Collection of Authenticated Cell Cultures (ECACC) di Public Health England.

Passate in rassegna le principali fonti di contaminazione crociata delle linee cellulari e scoprite come proteggere il lavoro dalle conseguenze della contaminazione.

Contaminazione microbica delle colture cellulari

I terreni per le colture cellulari e le condizioni di incubazione costituiscono l'ambiente ideale per le cellule ma anche per contaminanti batterici, fungini e virali. Per aumentare il livello di aderenza alla tecnica di coltura asettica, le colture devono essere regolarmente esaminate al microscopio per escludere la presenza di intrusi batterici e fungini. Alcuni contaminanti microbici ubiquitari sfuggono al rilevamento visivo, visto che si stima che fino al 30% di tutte le colture sia contaminato da micoplasma. I reagenti e i kit progettati per il rilevamento di micoplasmi non visibili sono spesso basati sull'amplificazione mediante PCR, tecnica che può essere utilizzata anche per rilevare contaminanti virali.

Scoprite come mantenere esenti le colture da contaminanti biologici e chimici.

Crescita cellulare scarsa

È frustrante quando le cellule in coltura che sembrano sane non riescono a raggiungere la confluenza. Una volta esclusa la presenza di contaminazioni, i possibili fattori che potrebbero limitare la duplicazione delle cellule sane sono:

• condizioni e qualità dei terreni di coltura/congelamento
• qualità e idoneità dei supplementi per l'applicazione di interesse
• conta imprecisa delle celle durante il congelamento o i passaggi in coltura

Quando le cellule sembrano vitali, ma non si espandono come previsto, scoprite come migliorare le condizioni di coltura per una crescita ottimale, prima di ricongelarle in azoto liquido.

Distacco di cellule con fenotipo aderente

Le cellule aderenti in coltura possono staccarsi spontaneamente, singolarmente o in strati. Se le culture aderenti non rimangono tali scoprite come controllare e ripristinare l’adesione in coltura.

Formazione di aggregati di cellule

Le cellule in sospensione simulano le condizioni in vivo come unità singole, separate l'una dall'altra. Se le cellule cominciano ad aggregarsi è possibile che ciò sia dovuto alla presenza di acidi nucleici appiccicosi, il che si verifica quando la coltura è sottoposta a condizioni di stress. Cosa si nasconde nel terreno che può causare l'aggregazione delle cellule? Leggete qui per capire come evitare l'aggregazione delle cellule.

Morte delle cellule nelle colture cellulari

In caso di morte delle cellule in coltura, la prima cosa da escludere è la presenza di contaminazioni da parte di microrganismi. Altri fattori che possono inficiare la salute delle cellule o portare a comportamenti incoerenti con il fenotipo includono:

• condizioni di congelamento dello stock
• numero di passaggi in coltura/sovraconfluenza
• condizioni di stress ambientale
• trattamento eccessivo con enzimi di dissociazione

Attrezzature appropriate, reagenti qualificati e protocolli qualificati sono fondamentali per affrontare gli imprevisti che talvolta si presentano nelle colture cellulari.

Presenza di precipitati nelle colture cellulari

Se non è dovuto alla presenza di contaminazioni, il particolato in coltura ha spesso una origine inorganica. Scoprite di più sui tamponi bilanciati, sui componenti dei terreni e su come mantenere in sospensione i componenti dei terreni.