Reagenti e substrati per immunorivelazione

Reagenti per il blocking

La saturazione (blocking) dei siti aspecifici di membrana impedisce il legame non specifico degli anticorpi che potrebbe portare ad un elevato background. Latte, gelatina e altri reagenti per il blocking a base di proteine sono efficaci per molte applicazioni di blotting, ma possono ridurre la sensibilità o la rivelazione mascherando il segnale o interferendo con la rivelazione di specifici target proteici. I reagenti per l’eliminazione del background Immobilon^® sono dei tamponi privi di proteine, pronti all'uso, ottimizzati per ridurre il background in chemiluminescenza, fluorescenza o nella rivelazione delle fosfoproteine.

Coniugati di streptavidina e anticorpi secondari

I moderni metodi di immunorivelazione sono basati sull’uso di enzimi come la perossidasi di rafano (HRP) o la fosfatasi alcalina (AP) legati covalentemente a streptavidina o a anticorpi secondari. L'enzima coniugato catalizza la degradazione di substrati specifici, con conseguente generazione di un segnale. Sono disponibili una varietà di coniugati con streptavidina, proteina A, proteina G e anticorpi secondari. Offriamo anche un'ampia selezione di substrati per HRP e AP per tecniche di rilevazione chemiluminescenti, cromogene e chemifluorescenti nel Western blotting.

SUBSTRATI CHEMILUMINESCENTI PER WESTERN BLOTTING

I substrati Immobilon^® HRP per la rilevazione chemiluminescente forniscono una maggiore sensibilità per blotting più quantitativi, e consentono di ridurre la concentrazione di anticorpo utilizzato per la rivelazione, riducendo i costi. Scegli il nostro portafoglio di substrati Immobilon® con diverse sensibilità, in pratici formati pronti all'uso o nei formati a due componenti, per ottimizzare la rivelazione nella tua applicazione di Western blotting.

• I substrati chemiluminescenti Immobilon^® Classico, Crescendo e Forte comprendono una famiglia di reagenti pre-miscelati pronti all'uso per la rivelazione basata sulla perossidasi; disponibili con un'ampia gamma di sensibilità, offrono rapporti segnale/background ottimali in un vasto intervallo di concentrazioni delle proteine bersaglio. Limiti di rilevabilità:
  • Immobilon^® Classico: ~ 6 pg di proteine target
  • Immobilon^® Crescendo: ~ 1-3 pg  di proteina target
  • Immobilon^® Forte: ~ 400 fg di proteina target
     
• I substrati Immobilon^® Western HRP, Immobilon^® ECL Ultra e Immobilon^® UltraPlus Western nei tradizionali formati a due componenti offrono una sensibilità eccezionale e una lunga durata del segnale. Queste formulazioni consentono l'uso di soluzioni di anticorpi primari più diluite. Limiti di rilevabilità:
  • Immobilon^® Western HRP: ~ 400 fg di proteina target
  • Immobilon^® ECL Ultra: pochi femtogrammi
  • Immobilon^® ECL UltraPlus Western Blot HRP: pochi femtogrammi

Sensibilità relativa dei substrati Immobilon^® per sistemi con HRP con rivelazione in chemiluminescenza

I reagenti Cytiva™ Amersham™ ECL utilizzano la rivelazione con HRP basata sul luminol e sono offerti in diverse formulazioni per coprire le diverse esigenze nelle applicazioni di Western blotting. 

• I reagenti per il rilevamento in Western blotting Cytiva Amersham™ ECL sono consigliati per l’utilizzo nel Western blotting usato come test di conferma.
• Il reagente per Western blotting Cytiva Amersham™ ECL Prime consente di rivelare proteine sia ad alta che a bassa abbondanza sullo stesso blot.
• I reagenti per il rilevamento in Western blotting Cytiva Amersham™ ECL Select offrono un'elevata sensibilità anche quando si utilizzano anticorpi primari e secondari diluiti.
• Il reagente per Western blotting Cytiva Amersham™ ECL Start è stato sviluppato per la rivelazione chemiluminescente di proteine​a media ed elevata espressione.

SUBSTRATI CROMOGENI PER WESTERN BLOTTING

La rivelazione cromogena si avvale della coniugazione con un enzima, ad esempio una perossidasi (ad es. HRP) o una fosfatasi alcalina (AP), per catalizzare una reazione che porta alla formazione di un precipitato colorato insolubile. I nostri substrati cromogeni per Western blotting sono disponibili in soluzione, polvere e compresse per fornire la massima flessibilità per quanto riguarda la conservazione e l'utilizzo.

• Le compresse SIGMAFAST™ DAB (substrato cromogeno per HRP) sono composte da un substrato che, reagendo con la perossidasi di rafano, produce un precipitato di colore marrone. Possono essere sciolte in acqua per preparare una soluzione tamponata pronta all'uso per la rivelazione nel blotting.
• I reagenti singoli BCIP/NBT (blu/viola) e BCIP/TNBT (blu/marrone) (substrati cromogeni per AP) sono substrati colorimetrici della fosfatasi alcalina che assicurano elevata sensibilità.
• Il substrato TMB Enhanced One Component HRP Membrane (substrato cromogeno della HRP) è un substrato colorimetrico monocomponente che produce un prodotto blu scuro.

Amplificatori di segnale

• Immobilon^® Signal Enhancer è un amplificatore di segnale progettato per l'uso in applicazioni di Western blotting quando si osserva una bassa intensità del segnale. L’amplificazione della reazione antigene-anticorpo può fare aumentare l'intensità del segnale di 2-10 volte. Immobilon^® Signal Enhancer è compatibile con membrane in PVDF e nitrocellulosa e può essere utilizzato con metodi di rivelazione cromogeni, chemiluminescenti e fluorescenti.
• Il kit SignalBoost™ Immunoreaction Enhancer è progettato per incrementare il segnale chemiluminescente o colorimetrico target su membrane di nitrocellulosa o PVDF

Reagenti e kit per lo stripping e il riutilizzo

I reagenti per lo stripping e il riutilizzo della membrana sono formulati appositamente per rimuovere rapidamente ed efficacemente gli anticorpi dai Western blot senza alterare in modo significativo le proteine immobilizzate.

• I reagenti ReBlot™ Plus consentono di rimuovere gli anticorpi legati alla membrana (stripping) in maniera efficace. Sono disponibili alcune varianti più o meno aggressive.