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Purificazione mediante FLAG®

Un primo piano di un ambiente di laboratorio. Il fuoco principale è su una pipetta blu che eroga una goccia in un piccolo contenitore di vetro parzialmente riempito con un liquido di colore rosa. Lo sfondo, sebbene sfocato, suggerisce la presenza di diversi altri strumenti o contenitori da laboratorio.

I tag FLAG® consentono una migliore rivelazione e una purificazione robusta di proteine di fusione ricombinanti, con comprovata utilità in numerose applicazioni a valle, dai saggi di legame e di attività all'analisi strutturale. L’epitopo FLAG® è un breve peptide di otto amminoacidi (tag DYKDDDDK), idrofilo, facilmente scindibile dall'enterochinasi (EK). A causa delle sue piccole dimensioni e della sua natura idrofila, il tag FLAG® è generalmente localizzato sulla superficie della proteina di fusione, riducendo al minimo gli effetti sulla sua funzione, la secrezione o il trasporto. Qualunque sia l'applicazione finale, forniamo gli strumenti necessari per esprimere, purificare e rivelare le proteine di fusione FLAG®. 

Questa pagina in breve

Una rappresentazione grafica in cui si osserva un motivo di cerchi e linee viola interconnessi su sfondo giallo. Il disegno che ricorda una struttura molecolare semplificata o un diagramma di rete vuole richiamare il tema dell'interconnettività o delle relazioni.

Espressione di proteine con tag FLAG®

Il nostro portafoglio per l’espressione di proteine con tag FLAG® include i vettori per un'efficiente espressione di proteine di fusione ricombinanti in sistemi batterici e di mammifero. La tecnologia SnapFast™vector consente di spostare facilmente il gene di interesse da un vettore all'altro, per un clonaggio più efficiente ed economico.

  • Il peptide FLAG® (sequenza: DYKDDDDK) è un piccolo tag che può essere incorporato con minimi rischi di ingombro sterico o di effetti negativi sulla solubilità delle proteine
  • La sequenza tag 3xFLAG® fonde tre epitopi FLAG® in tandem, per una rivelazione potenziata (fino a 200X) delle proteine​di fusione
Al centro dell'immagine, su un vivace sfondo giallo, è rappresentato un quadrato viola con angoli arrotondati. All'interno del quadrato c'è un disegno simmetrico con tre frecce orizzontali: una in alto orientata da sinistra e a destra, una al centro con le punte su entrambe le estremità e una in basso che costituisce l'immagine speculare della freccia in alto. Una linea verticale scende dalla freccia superiore a quella inferiore passando attraverso i loro punti di simmetria. Attorno a queste frecce sono sparse delle forme geometriche: cerchi e diamanti o rombi.

Purificazione di proteine con tag FLAG®

Offriamo una varietà di gel di agarosio per la purificazione mediante affinità, microsfere magnetiche, kit di purificazione e piastre rivestite per l'isolamento e la purificazione delle proteine con tag FLAG®.

  • I gel di agarosio per separazione mediante affinità consentono la purificazione delle proteine con tag di fusione utilizzando anticorpi anti-FLAG® immobilizzati alle sferette di agarosio e sono adatti alla purificazione su piccola e grande scala. Queste resine sono adatte per la purificazione in colonna con flusso per gravità.
  • Le sferette magnetiche Anti-FLAG® M2permettono di purificare la proteina ricombinante con il tag utilizzando un rack magnetico o una piattaforma che separa le sferette e isola la proteina per il successivo, rapido processamento.
  • Le piastre da 96 pozzetti rivestite con Anti-FLAG®M2 High Sensitivity sono adatte per screening di espressione, studi di interazioni proteina-proteina e test ELISA.
Disegno al tratto viola su sfondo giallo, che ricorda una rappresentazione astratta della lettera "Y". Il disegno è semplice con linee pulite e non presenta abbellimenti o motivi aggiuntivi.

Rivelazione del tag FLAG®

I tag FLAG® e 3xFLAG™ presentano dei siti di legame per gli anticorpi monoclonali anti-FLAG® altamente specifici, ma anche per anticorpi policlonali e coniugati idonei per saggi ELISA, applicazioni di blotting, immunofluorescenza, immunocitochimica, immunoistochimica (IHC), blotting e citometria a flusso.

  • L’anticorpo anti FLAG®M2 si lega a proteine di fusione con FLAG® N-terminale, FLAG® C-terminale e Met-FLAG®.
  • Il legame dell’anticorpo anti-FLAG®M1 è calcio-dipendente e specifico per il tag FLAG® in posizione N-terminale.
  • L’anticorpo anti-FLAG® M5 lega le proteine di fusione con FLAG® e Met-FLAG® N-terminale.
*IP=immunoprecipitazione; IC=immunochimica, WB=Western blot, EIA=saggio di immunoadsorbimento enzimatico (ELISA)

Risorse correlate

  • Brochure: Refine Protein Preparation

    Today, researchers are challenged to create high quality samples for meaningful protein analysis, often using cumbersome traditional sample preparation methods. With over 50 years of experience in developing protein sample preparation technologies, Merck is constantly innovating new tools to offer you rapid and efficient solutions that can be smoothly integrated into your workflow.

  • User Guide: FLAG - Proven System for Detection and Purification of Proteins

    The FLAG Expression System is an established way to express, purify, and detect recombinant fusion proteins. FLAG and 3×FLAG® have proven utility in numerous applications such as Western blotting, immunocytochemistry, immunoprecipitation, flow cytometry, protein purification, and in the study of protein-protein interactions, cell ultrastructure, and protein localization. These small hydrophilic tags facilitate superior detection and purification of recombinant fusion proteins when using our highly specific and sensitive ANTI-FLAG® antibodies.

  • Application Note: EZview™ Red Protein A and ANTI-FLAG® M2 Affinity Gels - Immunoprecipitation with Enhanced Visibility Affinity Beads

    The strength and specificity of interactions between biomolecules have been exploited for years in biochemical research. Affinity-based protein purification techniques have been used extensively to isolate and purify specific proteins or classes of proteins from complex biochemical mixtures, such as cell lysates..

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