ENDOARGS-RO

Endoproteinasi Asp-N per sequenziamento

from Pseudomonas fragi

• Sinonimo/i: proteasi
• Classificazione EC (Enzyme Commission): 3.4.24.33 (BRENDA, IUBMB)
• Codice UNSPSC: 12352204

Proprietà

• Saggio: ≥90% (SDS-PAGE)
• Stato: lyophilized
• Attività specifica: ≥20000 units/mg protein
• PM: 27 kDa
• Confezionamento: pkg of 2 μg (11420488001); pkg of 3 × 2 μg (11054589001)
• Produttore/marchio commerciale: Roche
• pH ottimale: 7.0-8.0
• Intervallo di pH: 6.5-9.0
• Temperatura di conservazione: 2-8°C

Descrizione

Descrizione generale

Questo ceppo selvatico di Pseudomonas fragi segrega una metalloproteasi che scinde i legami peptidici in N-terminale in corrispondenza di piccoli amminoacidi idrofili. Una forma mutante di questo ceppo produce l′endoproteinasi Asp-N per sequenziamento, che viene isolata come una proteasi altamente purificata e specifica.

Specificità

L′endoproteinasi Asp-N per sequenziamento è una metalloproteasi. Nei tamponi di fosfato, acetato o Tris a pH 6,0-8,5, scinde specificamente i legami peptidici in N-terminale in corrispondenza dell′acido aspartico e cisteico. Se la cisteina viene ridotta o alchilata, si scinde soltanto -↓-Asp-X.
La specificità dell′endoproteinasi Asp-N per sequenziamento viene verificata con il glucagone come substrato. Elevate concentrazioni di endoproteinasi Asp-N per sequenziamento (una parte per il peso dell′enzima con 10 parti per il peso del glucagone) vengono sottoposte a incubazione per rilevare eventuali tracce di impurità quali le proteasi contaminanti.
Inattivazione termica: La proteasi viene arrestata tramite ebollizione per 5 minuti.

Applicazioni

L′endoproteinasi Asp-N per sequenziamento viene utilizzata per l′analisi della struttura e della sequenza delle proteine.[1][2]

Nota sulla preparazione

Concentrazione di lavoro: 2 μg /50 μl di acqua bidistillata
Un flaconcino (= 2 μg di enzima) viene sciolto in 50 μl di acqua bidistillata per ottenere una concentrazione del tampone di 10 mM di Tris-HCl a pH 7,5.
Soluzione di lavoro: il solvente consigliato è l′acqua bidistillata.
Condizioni di conservazione (soluzione di lavoro): da -15 a -25 °C
La soluzione in acqua bidistillata è stabile per una settimana alla temperatura massima di 2-8 °C e per circa un mese a una temperatura compresa tra -15 e -25 °C; lo scongelamento ripetuto è da evitare.

Ricostituzione

L′endoproteinasi Asp-N liofilizzata per sequenziamento è ricostituita in 50 μL di acqua bidistillata. Questo risulta in una concentrazione del tampone di 10 mM di Tris-HCl a pH 7,5. Per evitare l′autolisi, la temperatura di incubazione non deve superare i 37 °C.

Altre note

Da utilizzare solo per ricerca nel settore Life Science. Non usare a scopo diagnostico.

Informazioni sulla sicurezza

• Codice della classe di stoccaggio: 11 - Combustible Solids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): WGK 1
• Punto d’infiammabilità (°F): does not flash
• Punto d’infiammabilità (°C): does not flash