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Merck

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P8375

Perossidasi

Type VI, essentially salt-free, lyophilized powder, ≥250 units/mg solid (using pyrogallol)

Sinonimo/i:

Enzima di rilevamento, HRP, Perossidasi, Donatore: idrogeno-perossido ossidoreduttasi, Perossidasi di rafano

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Informazioni su questo articolo

Numero CAS:
eCl@ss:
32160410
UNSPSC Code:
12352204
NACRES:
NA.54
EC Number:
232-668-6
MDL number:
Numero CE:
Specific activity:
≥250 units/mg solid (using pyrogallol)

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type

Type VI

Quality Segment

form

essentially salt-free, lyophilized powder

specific activity

≥250 units/mg solid (using pyrogallol)

mol wt

~44 kDa

solubility

0.1 M phosphate buffer: soluble 10 mg/mL, clear, orange to red (pH 6.0)

absorbance ratio

RZ 2.5-4.0

application(s)

diagnostic assay manufacturing

storage temp.

2-8°C

SMILES string

[O+H2]O[O-]

InChI

1S/H2O3/c1-3-2/h1-2H

InChI key

JSPLKZUTYZBBKA-UHFFFAOYSA-N

General description

La perossidasi di rafano si isola dalle radici del rafano (Amoracia rusticana) e appartiene al gruppo delle perossidasi con ferroprotoporfirina. L′HRP è un polipeptide a singola catena che contiene quattro ponti disolfuro. È una glicoproteina che contiene il 18% di carboidrati. La composizione dei carboidrati include galattosio, arabinosio, xilosio, fucosio, mannosio, mannosamina e galattosamina, a seconda del singolo isozima. Il peso molecolare (circa 44 kDa) include la catena polipeptidica (33.890 Dalton), la emina con Ca2+ (circa 700 Dalton) e il carboidrato (circa 9.400 Dalton). Esistono almeno sette isoenzimi di HRP. Il punto isoelettrico degli isoenzimi della perossidasi di rafano è compreso fra 3,0 e 9,0.

Application

La perossidasi da rafano (HRP) è isolata da radici di rafano (Amoracia rusticana) e fa parte del gruppo delle perossidasi da ferroprotoporfirine. È usato in applicazioni biochimiche come Western blot, ELISA e immunoistochimica. La perossidasi del rafano è usata per amplificare un segnale debole e aumentare la rivelabilità di una molecola bersaglio come una proteina. Il prodotto P8375 tipo VI è una polvere liofilizzata essenzialmente priva di sali. È comunemente usato per determinare i livelli di glucosio e perossidi in soluzione. È stato impiegato per studiare l′ingresso sensoriale dei neuroni del midollo spinale[1].
L′enzima è stato usato per sviluppare un biosensore termostabile con la soia basato sulla perossidasi facendo una reazione incrociata e ′collegando′ elettricamente l′enzima attraverso un idrogel conduttivo a un elettrodo al carbonio vetroso. È stato anche usato per determinare l′ossidazione di lipoproteine a bassa densità.[2]

Biochem/physiol Actions

Incubata con un substrato la perossidasi del rafano produce un derivato colorato fluorimetrico o luminescente della molecola marcata consentendone la quantifica. È stato dimostrato che la perossidasi del rafano riduce leggermente il livello di inibizione in un mutante cydAB. Gli inibitori conosciuti sono azoturo di sodio, cianuro, L-cistina, dicromato, etilentiourea, idrossilammina, solfuro, vanadato, acido p-amminobenzoio e ioni Cd2+, Co2+, Cu2+, Fe3+, Mn2+, Ni2+e Pb2+ .
HRP si combina bene con l′acqua ossigenata (H2O2) e il complesso risultante [HRP-H2O2] è in grado di ossidare una grande varietà di donatori di idrogeno. Il pH ottimale è fra 6,0 e 6,5 e l′enzima ha la massima stabilità nell′intervallo di pH 5,0-9,0. HRP si può coniugare ad anticorpi con diversi metodi inclusi la glutaraldeide, ossidazione con periodato, attraverso legami disolfuro e anche via cross linker a base di ammine e tioli. È più piccolo e più stabile degli enzimi marcatori galattosidasi-β e fosfatasi alcalina e per questo è la marcatura preferita. Per di più la sua glicolizzazione porta a minori legami non specifici.

Analysis Note

Il RZ (Reinheitszahl) è il rapporto di assorbanza A403/A275 determinato a 0,5-1,0 mg/mL in acqua deionizzata. Misura il contenuto di emina, non l′attività enzimatica. Anche preparazioni con un RZ elevato possono avere una bassa attività enzimatica.

Other Notes

Per maggiori informazioni sulla perossidasi visitare la pagina www.sigma-aldrich.com/enzymeexplorer.
Una unità di pirogallolo forma 1,0 mg di purpurogallina da pirogallolo in 20 secondi a pH 6,0 e 20 °C.

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Perossidasi For research or further manufacturing use only. Not intended for direct use in humans or animals. Non-TSCA use only in US, Type VI, powder, stabilized, ≥250 units/mg solid (using pyrogallol)

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specific activity

≥250 units/mg solid (using pyrogallol)

specific activity

≥250 units/mg solid (using pyrogallol)

specific activity

≥50 units/mg solid (using pyrogallol)

specific activity

200-300 units/mg solid (using pyrogallol)

form

essentially salt-free, lyophilized powder

form

powder, stabilized

form

essentially salt-free, lyophilized powder

form

essentially salt-free, lyophilized powder

application(s)

diagnostic assay manufacturing

application(s)

diagnostic assay manufacturing

application(s)

-

application(s)

-

mol wt

~44 kDa

mol wt

-

mol wt

~44 kDa

mol wt

~44 kDa

storage temp.

2-8°C

storage temp.

2-8°C

storage temp.

2-8°C

storage temp.

2-8°C

solubility

0.1 M phosphate buffer: soluble 10 mg/mL, clear, orange to red (pH 6.0)

solubility

phosphate buffer: soluble

solubility

0.1 M phosphate buffer: soluble (pH 6.0), H2O: soluble

solubility

-


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Classe di stoccaggio

11 - Combustible Solids

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WGK 1

ppe

Eyeshields, Gloves, type N95 (US)



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  1. What can you tell me about the stability of Peroxidase from horseradish, Product P8375, (as is, in suspension and in solution)?

    1 answer
    1. This product is stable as a powder, kept refrigerated. See the certificate of analysis for a lot-specific recommended retest date. It is also stable as a crystalline suspension of 3.2 M (NH4)2SO4 solution containing potassium phosphate buffer, pH 6.0 (see Product No. P6140). It is reasonably stable in solution in phosphate buffer. We have found that at 10 mg/mL in 0.1 phosphate buffer, pH 6.0, solutions kept frozen at -20°C lose less than 2% of their activity per week.

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  2. How do I convert units of Peroxidase from horseradish, Product P8375, to solid?

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    1. The optimal pH range for product P8375 is 6.0 - 6.5.

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