D4263

Deoxyribonuclease I aus Rinderpankreas

Standardized vial containing 2,000 Kunitz units of DNase I (D4527), vial of ≥0.25 mg total protein

• Synonym(e): DNase I, Deoxyribonucleat-5′-oligonucleotido-hydrolase
• CAS-Nummer: 9003-98-9
• UNSPSC Code: 12352204
• NACRES: NA.54
• EC Number: 232-667-0
• MDL number: MFCD00130918
• EG-Nummer: 3.1.21.1 (BRENDA, IUBMB)
• Specific activity: 1700—2300 U/vial
• Biological source: bovine pancreas

Eigenschaften

• biological source: bovine pancreas
• Quality Segment: 200
• form: powder
• specific activity: 1700—2300 U/vial
• mol wt: ~31 kDa
• purified by: chromatography
• packaging: vial of ≥0.25 mg total protein
• technique(s): DNA extraction: suitable
• solubility: 0.15 M NaCl: soluble 5.0 mg/mL, clear
• suitability: suitable for molecular biology
• application(s): diagnostic assay manufacturing
• storage temp.: −20°C

Beschreibung

Application

DNA-Entfernung in Proteinproben

DNAse wird verwendet, um in einem ersten Schritt Einzelstrangbrüche in der DNA zu bewirken, um markierte Basen in die DNA einzubauen. DNAse I von Sigma wird gemeinsam mit anderen Enzymen für die Tumorernte und -dissoziation während der Isolierung und molekularen Charakterisierung von Karzinomstammzellen in Brusttumoren von MMTV-Wnt-1-Mäusen verwendet.[1]

Deoxyribonuclease I aus dem Rinderpankreas wurde in einer Studie verwendet, um zu bestimmen, ob Säugetier-Deoxyribonucleasen I auf Basis ihrer unterschiedlichen Gewebekonzentrationen in drei Typen klassifiziert werden können. Deoxyribonuclease I aus dem Rinderpankreas wurde zudem in einer Studie zum Vergleich der drei Primärstrukturen der Deoxyribonuclease verwendet, die aus dem Pankreas von Rindern, Schafen und Schweinen isoliert wurden.

Biochem/physiol Actions

DNAse I ist eine Endonuklease, die auf Phosphodiesterbindungen nahe Pyrimidinen wirkt, um Polynukleotide mit terminalen 5′-Phosphaten zu erzeugen. Bei Anwesenheit von Mg²⁺ spaltet DNAse I jeden DNA-Strang unabhängig und an beliebigen Stellen. Beide DNA-Stränge werden bei Anwesenheit von Mg²⁺ ungefähr an den gleichen Stellen gespaltet. Der optimale pH-Wert liegt zwischen 7 und 8. Zweiwertige Kationen wie Mn²⁺, Ca²⁺, Co²⁺ und Zn²⁺ aktivieren das Enzym. Eine Konzentration von 5 mM Ca²⁺ stabilisiert das Enzym gegen proteolytische Verdauung. DNAse I vom Rinderpankreas besteht aus vier chromatographisch unterscheidbaren Komponenten, A, B, C und D, mit molaren Verhältnissen von 4:1:1. Es finden sich nur geringfügige Mengen an D.[2] 2-Mercaptoethanol, Chelatoren, Natriumdodecylsulfat (SDS)[3] und Aktin[4] hemmen bekanntlich die Enzymaktivität.

Features and Benefits

Wirksame DNA-Entfernung: Desoxyribonuklease I aus Rinderpankreas ist eine wirksame Endonuklease, die beide DNA-Stränge zufällig spaltet, was sie zu einer verlässlichen Wahl für die DNA-Entfernung aus Proteinproben macht.

Vielfältige Anwendung: Dieses Enzym kann zum Nicken von DNA, Einbringen von markierten Basen in DNA und Isolieren sowie molekularen Charakterisieren von Krebsstammzellen in murinen Brustkrebstumoren eingesetzt werden. Es eignet sich auch für Vergleichsstudien von aus Rind-, Schaf- und Schweinepankreas isolierter Desoxyribonuklease.

Stabil: Das Enzym bleibt bei 60 °C und einem pH-Wert von 5 bis 7 bis zu fünf Stunden stabil und kann mit nur einem geringen Aktivitätsverlust bei −20 °C bis zu einer Woche gelagert werden. Diese Stabilität macht es zu einer kostengünstigen und praktischen Option.

Preparation Note

Das Enzympulver kann in Wasser oder in einem beliebigen Puffer mit einem pH-Wert von 4,0–9,0 (außer Phosphatpuffer) rekonstituiert werden. Calciumchelatoren sind zu vermeiden. 10 mg/mL Lösung von DNAse I in 0,15 M NaCl können <10 % ihrer Aktivität verlieren, wenn sie eine Woche lang in Aliquoten bei −20 °C aufbewahrt wird. Die gleichen Lösungen können bei Lagerung in Aliquoten bei 2–8 °C ca. 20 % ihrer Aktivität verlieren. Die Lösung bleibt bis zu fünf Stunden bei 60 °C und einem pH zwischen 5 und 7 aktiv und verliert ihre Aktivität in <10 Minuten bei 68 °C. Sie verliert ihre Aktivität mit einer Rate von 6 % pro Stunde in Acetatpuffer (pH 5,0) und Tris-Puffer (pH 7,2) bei einer Konzentration von 1 mg/mL.

Analysis Note

Proteinbestimmung durch Biuret.

Other Notes

Eine Kunitz-Einheit erzeugt unter Verwendung von DNA (Typ 1 oder III) als Substrat ein ΔA₂₆₀ von 0,001 pro min pro mL bei einem pH-Wert von 5,0 und einer Temperatur von 25° C.

Sicherheitshinweise

• pictograms: GHS08
• signalword: Danger
• hcodes: H334
• pcodes: P261 - P284 - P501
• Hazard Classifications: Resp. Sens. 1
• Lagerklasse: 11 - Combustible Solids
• wgk: WGK 3
• flash_point_f: Not applicable
• flash_point_c: Not applicable
• ppe: Eyeshields, Gloves, type N95 (US)