D4513

Deoxyribonuclease I aus Rinderpankreas

Type II-S, lyophilized powder, Protein ≥80 %, ≥2,000 units/mg protein

• Synonym(e): DNase I, Deoxyribonucleat-5′-oligonucleotido-hydrolase
• CAS-Nummer: 9003-98-9
• UNSPSC Code: 12352204
• NACRES: NA.54
• EC Number: 232-667-0
• MDL number: MFCD00130918
• EG-Nummer: 3.1.21.1 (BRENDA, IUBMB)
• Specific activity: ≥2,000 units/mg protein
• Biological source: bovine pancreas

Eigenschaften

• biological source: bovine pancreas
• Quality Level: 300
• sterility: sterile-filtered
• type: Type II-S
• form: lyophilized powder
• specific activity: ≥2,000 units/mg protein
• mol wt: ~31 kDa
• purified by: chromatography
• composition: Protein, ≥80%
• packaging: vial of ≥10.0 mg protein
• technique(s): DNA purification: suitable
• impurities: endotoxin, tested
• solubility: 0.15 M NaCl: soluble 5.0 mg/mL, clear(lit.)
• suitability: suitable for molecular biology
• application(s): diagnostic assay manufacturing
• foreign activity: Chymotrypsin ≤0.01%, Protease ≤0.005%, RNase ≤0.01%
• storage temp.: −20°C

Beschreibung

Application

DNA-Entfernung in Proteinproben

DNase I von Sigma wird im Hinblick auf die Fähigkeit zur Hydrolysierung von [¹⁴C]DNA [¹⁴C]DNA mit dem aus menschlichem Urin gewonnenen Interleukin-1-Hemmer verglichen.[1] Sie wird zudem zum Spalten eines Hind III/Nci I-Restriktionsfragments mit 139 Basenpaaren verwendet, um die Stabilität des Enzyms bei Verwendung in Footprinting-Experimenten zu untersuchen. DNase I wird beim Footprinting verbreitet zur Untersuchung der Arzneimittel- und Proteinbindung an DNA eingesetzt.[2]

Desoxyribonuclease I aus Rinderpankreas wird in einer Studie zur Untersuchung eines neuen Ansatzes zur Gewinnung von hochaktiver RNase, DNase, Cholesterinesterase und Trypsin aus Rinderpankreas verwendet. Desoxyribonuclease I aus Rinderpankreas wird zudem in einer Studie zur Untersuchung der Isolierung und weiteren Charakterisierung von DNase aus der Leber von Karpfen verwendet.

Biochem/physiol Actions

DNase I ist eine Endonuklease, die auf Phosphodiesterbindungen neben Pyrimidinen wirkt, um Polynukleotide mit terminalen 5′-Phosphaten zu erzeugen. Bei Anwesenheit von Mg²⁺ spaltet DNase I jeden DNA-Strang unabhängig und an beliebigen Stellen. Beide DNA-Stränge werden in Anwesenheit von Mn²⁺ ungefähr an der gleichen Stelle gespaltet. Der optimale pH-Wert liegt zwischen 7 und 8. Zweiwertige Kationen wie Mn²⁺, Ca²⁺, Co²⁺ und Zn²⁺ aktivieren das Enzym. Eine Konzentration von 5 mM Ca²⁺ stabilisiert das Enzym gegen proteolytische Verdauung. DNase I aus Rinderpankreas besteht aus den vier chromatographisch unterscheidbaren Komponenten A, B, C und D mit einem Molverhältnis von 4:1:1. Es finden sich nur geringfügige Mengen an D.[3] 2-Mercaptoethanol, Chelatoren, Natriumdodecylsulfat (SDS)[4] und Aktin[5] hemmen bekanntlich die Enzymaktivität.

Physical form

Lyophilisiertes Pulver, das Calciumchlorid enthält

Preparation Note

Das Enzympulver kann in Wasser oder in einem beliebigen Puffer mit einem pH-Wert von 4,0–9,0 (außer Phosphatpuffer) rekonstituiert werden. Calciumchelatoren sind zu vermeiden. 10 mg/mL Lösung von DNase I in 0,15 M NaCl kann <10 % ihrer Aktivität verlieren, wenn sie eine Woche lang in Aliquoten bei −20 °C aufbewahrt wird. Die gleiche Lösung kann bei Lagerung in Aliquoten bei 2–8 °C ca. 20 % ihrer Aktivität verlieren. Die Lösung bleibt bei 60 °C und einem pH-Wert zwischen 5 und 7 bis zu fünf Stunden aktiv und verliert ihre Aktivität in <10 Minuten bei 68 °C. Sie verliert ihre Aktivität mit einer Rate von 6 %/Stunde in Acetatpuffer (pH-Wert 5,0) und Tris-Puffer (pH-Wert 7,2) bei einer Konzentration von 1 mg/mL.

Analysis Note

Proteinbestimmung durch Biuret.

Other Notes

Gewinner des CiteAb Award 2024 in der Kategorie „Supplier Succeeding in Parkinson′s Research“ (Erfolgreiche Anbieter in der Parkinson-Forschung)

Eine Kunitz-Einheit erzeugt unter Verwendung von DNA Typ I oder III als Substrat ein ΔA₂₆₀ von 0,001 je min und mL bei einem pH-Wert von 5,0 und einer Temperatur von 25 °C. (1 Einheit = 1 Kunitz-Einheit)

Sicherheitshinweise

• pictograms: GHS08
• signalword: Danger
• hcodes: H334
• pcodes: P261 - P284 - P501
• Hazard Classifications: Resp. Sens. 1
• Lagerklasse: 11 - Combustible Solids
• wgk: WGK 3
• flash_point_f: Not applicable
• flash_point_c: Not applicable
• ppe: Eyeshields, Gloves, type N95 (US)