D4527

Deoxyribonuclease I aus Rinderpankreas

Type II, lyophilized powder, Protein ≥80 %, ≥2,000 units/mg protein

• Synonym(e): DNase I, Deoxyribonucleat-5′-oligonucleotido-hydrolase
• CAS-Nummer: 9003-98-9
• UNSPSC Code: 12352204
• NACRES: NA.54
• EC Number: 232-667-0
• MDL number: MFCD00130918
• EG-Nummer: 3.1.21.1 (BRENDA, IUBMB)
• Specific activity: ≥2,000 units/mg protein
• Biological source: bovine pancreas

Eigenschaften

• biological source: bovine pancreas
• Quality Segment: 300
• type: Type II
• form: lyophilized powder
• specific activity: ≥2,000 units/mg protein
• mol wt: ~31 kDa
• purified by: chromatography
• composition: Protein, ≥80%
• technique(s): DNA extraction: suitable
• solubility: 0.15 M NaCl: soluble 5.0 mg/mL, clear
• suitability: suitable for molecular biology
• application(s): diagnostic assay manufacturing
• foreign activity: Chymotrypsin ≤0.01%, Protease ≤0.005%, RNase ≤0.01%
• shipped in: wet ice
• storage temp.: −20°C

Beschreibung

Application

DNA-Entfernung in Proteinproben

DNase I wird verwendet, um in einem ersten Schritt Einzelstrangbrüche in der DNA zu bewirken, um markierte Basen in die DNA einzubauen. Das Enzym von Sigma wird bei der Herstellung von Zelllysat aus MDCK (Madin-Darby Canine Kidney) II-Zelllinien zusammen mit RNase in Nuklease-Stammlösung verwendet.[1] Außerdem wird es bei der RNA-Extraktion aus dem Sindbis-Virus eingesetzt.[2]

Desoxyribonuklease I aus Rinderpankreas wird für die Identifizierung, Lokalisierung und Expression von zwei neuartigen menschlichen Genen verwendet, die Desoxyribonuklease I ähneln. Desoxyribonuklease I aus Rinderpankreas wird außerdem in einer Studie verwendet, um einen neuen Ansatz für die Herstellung von hochgradig aktiver RNase, DNase, Cholesterolesterase und Trypsin aus Rinderpankreas zu untersuchen.

Biochem/physiol Actions

DNAse I ist eine Endonuklease, die auf Phosphodiesterbindungen nahe Pyrimidinen wirkt, um Polynukleotide mit terminalen 5′-Phosphaten zu erzeugen. Bei Anwesenheit von Mg²⁺ spaltet DNAse I jeden DNA-Strang unabhängig und an beliebigen Stellen. Beide DNA-Stränge werden bei Anwesenheit von Mg²⁺ ungefähr an den gleichen Stellen gespaltet. Der optimale pH-Wert liegt zwischen 7 und 8. Zweiwertige Kationen wie Mn²⁺, Ca²⁺, Co²⁺ und Zn²⁺ aktivieren das Enzym. Eine Konzentration von 5 mM Ca²⁺ stabilisiert das Enzym gegen proteolytische Verdauung. DNase I vom Rinderpankreas besteht aus den vier chromatographisch unterscheidbaren Komponenten A, B, C und D, die in einem molaren Verhältnis von 4:1:1 vorliegen. Es finden sich nur geringfügige Mengen an D.[3] 2-Mercaptoethanol, Chelatoren, Natriumdodecylsulfat (SDS)[4] und Aktin[5] hemmen bekanntlich die Enzymaktivität.

Features and Benefits

Wirksam für das Nicking von DNA und Entfernen von DNA aus Proteinproben

Physical form

Enthält Calciumchlorid

Preparation Note

Das Enzympulver kann in Wasser oder in einem beliebigen Puffer mit einem pH-Wert von 4,0–9,0 (außer Phosphatpuffer) rekonstituiert werden. Calciumchelatoren sind zu vermeiden. 10 mg/ml Lösung von DNAse I in 0,15 M NaCl kann <10 % ihrer Aktivität verlieren, wenn sie eine Woche lang in Aliquoten bei −20 °C aufbewahrt wird. Die gleichen Lösungen können bei Lagerung in Aliquoten bei 2–8 °C ca. 20 % ihrer Aktivität verlieren. Die Lösung bleibt bis zu fünf Stunden bei 60 °C und einem pH-Wert zwischen 5 und 7 aktiv und verliert ihre Aktivität in <10 Minuten bei 68 °C. Sie verliert ihre Aktivität mit einer Rate von 6 % pro Stunde in Acetatpuffer (pH 5,0) und Tris-Puffer (pH 7,2) bei einer Konzentration von 1 mg/ml.

Analysis Note

Proteingehalt mittels Biuret-Reaktion bestimmt.

Other Notes

Eine Kunitz-Einheit erzeugt unter Verwendung von DNA (Typ I oder III) als Substrat eine Veränderung von A₂₆₀ von 0,001 pro Minute pro ml bei einem pH-Wert von 5,0 und einer Temperatur von 25 °C.

Sicherheitshinweise

• pictograms: GHS08
• signalword: Danger
• hcodes: H334
• pcodes: P261 - P284 - P501
• Hazard Classifications: Resp. Sens. 1
• Lagerklasse: 11 - Combustible Solids
• wgk: WGK 3
• flash_point_f: Not applicable
• flash_point_c: Not applicable