D5025

Deoxyribonuclease I aus Rinderpankreas

Type IV, lyophilized powder, ≥2,000 Kunitz units/mg protein

• Synonym(e): DNase I, Deoxyribonucleat-5′-oligonucleotido-hydrolase
• CAS-Nummer: 9003-98-9
• EC-Nummer: 3.1.21.1 (BRENDA, IUBMB)
• EG-Nummer: 232-667-0
• MDL-Nummer: MFCD00130918
• UNSPSC-Code: 12352204
• NACRES: NA.54

Eigenschaften

• Biologische Quelle: bovine pancreas
• Qualitätsniveau: 300
• Typ: Type IV
• Form: lyophilized powder
• Spezifische Aktivität: ≥2,000 Kunitz units/mg protein
• Mol-Gew.: ~31 kDa
• Aufgereinigt durch: chromatography
• Zusammensetzung: Protein, ≥80%
• Methode(n): DNA purification: suitable
• Löslichkeit: 0.15 M NaCl: soluble 5.0 mg/mL, clear, colorless
• Eignung: suitable for molecular biology
• Anwendung(en): diagnostic assay manufacturing; diagnostic assay manufacturing
• Fremdaktivität: Chymotrypsin ≤0.5%; Protease ≤0.05%; RNase ≤0.02%
• Versandbedingung: wet ice
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Anwendung

DNA-Entfernung in Proteinproben

DNase I wird verwendet, um in einem ersten Schritt Einzelstrangbrüche in der DNA zu bewirken, um markierte Basen in die DNA einzubauen. Das Enzym von Sigma wurde für die Verarbeitung von Rattenhirngewebe verwendet. Die Studie zeigte, dass axonales Wachstum auf Astrozyten nicht von Oligodendrozyten gehemmt wird.[1] In einer weiteren Studie wurden aufgetaute, fixierte Proben von E. coli mit DNase I von Sigma zusammen mit anderen Enzymen aufgeschlossen. Der Aufschluss wurde vor der Permeabilisierung und Färbung der Nukleinsäuren durchgeführt.[2]

Desoxyribonuklease I aus Rinderpankreas wurde in einer Studie zur Untersuchung einer zweidimensionalen Zymografie von Nukleasen in Bacillus subtilis eingesetzt. Desoxyribonuklease I aus Rinderpankreas wurde auch in einer Studie zur Untersuchung der Wirkungen von an die große und kleine Furche bindenden Arzneimitteln und Interkalatoren auf die DNA-Assoziation der an die kleine Furche bindenden Proteine RecA und Desoxyribonuklease I eingesetzt.

Biochem./physiol. Wirkung

DNase I ist eine Endonuklease, die auf Phosphodiesterbindungen neben Pyrimidinen wirkt, um Polynukleotide mit terminalen 5′-Phosphaten zu erzeugen. Bei Anwesenheit von Mg²⁺ spaltet DNase I jeden DNA-Strang unabhängig und an beliebigen Stellen. Beide DNA-Stränge werden in Anwesenheit von Mn²⁺ ungefähr an den gleichen Stellen gespaltet.[3] Der optimale pH-Wert liegt zwischen 7 und 8. Zweiwertige Kationen wie Mn²⁺, Ca²⁺, Co²⁺ und Zn²⁺ aktivieren das Enzym.[4] Eine Konzentration von 5 mM Ca²⁺ stabilisiert das Enzym gegen proteolytische Verdauung. DNase I aus Rinderpankreas besteht aus vier chromatografisch unterscheidbaren Komponenten, A, B, C und D, mit molaren Verhältnissen von 4:1:1. Es finden sich nur geringfügige Mengen an D.[5] 2-Mercaptoethanol, Chelatoren, Natriumdodecylsulfat (SDS)[6] und Aktin[7] hemmen bekanntlich die Enzymaktivität.

Einheitendefinition

Eine Kunitz-Einheit erzeugt unter Verwendung von DNA Typ I oder III als Substrat ein ΔA₂₆₀ von 0,001 je min je ml bei einem pH-Wert von 5,0 und einer Temperatur von 25 °C.

Physikalische Form

Lyophilisiertes Pulver, das Calciumchlorid enthält

Angaben zur Herstellung

10 mg/ml Lösung von DNase I in 0,15 M NaCl können <10 % ihrer Aktivität verlieren, wenn sie eine Woche lang in Aliquoten bei −20 °C aufbewahrt wird. Die gleichen Lösungen können bei Lagerung in Aliquoten bei 2–8 °C etwa 20 % ihrer Aktivität verlieren. Die Lösung bleibt bei 60 °C und einem pH-Wert zwischen 5 und 7 bis zu fünf Stunden aktiv und verliert ihre Aktivität in <10 Minuten bei 68 °C. Sie verliert ihre Aktivität mit einer Rate von 6 %/Stunde in Acetatpuffer (pH-Wert 5,0) und Tris-Puffer (pH-Wert 7,2) bei einer Konzentration von 1 mg/ml.

Hinweis zur Analyse

Proteinbestimmung durch Biuret.

Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS08
• Signalwort: Danger
• H-Sätze: H334
• P-Sätze: P261 - P284 - P501
• Gefahreneinstufungen: Resp. Sens. 1
• Lagerklassenschlüssel: 11 - Combustible Solids
• WGK: WGK 3
• Flammpunkt (°F): Not applicable
• Flammpunkt (°C): Not applicable