Zelldissoziationsreagenzien
Um ihre ursprüngliche Umgebung nachzubilden, werden adhärente Zellphänotypen (z. B. Epithelzellen) in der Regel auf mit Gewebekulturen behandelte Oberflächen ausgesät, an denen sie sich anheften, um zu überleben und sich zu vermehren. Für die Vermehrung, Zählung und nachgeschaltete Analyse müssen adhärente Zellen und Zellen aus festen Geweben dissoziiert werden, um Suspensionen zu erzeugen. Einzelzellsuspensionen werden für die Zellzählung, die erneute Aussaat für Subkulturen und zelluläre Assays/Analysen benötigt.
Dissoziationsreagenzien können natürlich vorkommende Enzyme oder schonendere nicht-enzymatische Alternativen einschließen. Diese Reagenzien wirken mittels Chelatisierung von Kalzium, um zu verhindern, dass sich Cadherine an der Oberfläche oder untereinander anlagern und Zellen während des Kultivierungsprozesses von diesen Oberflächen lösen. Zelldissoziationsreagenzien, die bei der Zellkultivierung zum Einsatz kommen, können spezifisch für Substrate der extrazellulären Matrix (EZM) sein.
Unser umfassendes Angebot an Zelldissoziationsreagenzien umfasst:
Trypsin, rekombinantes Trypsin, StableCell™ Trypsin
Trypsin ist eine Serinprotease und eines der gebräuchlichsten Ablösungsenzyme. Es wird bei adhärenten Zelllinien und zur Gewebedissoziation verwendet. Rohtrypsin-Zubereitungen haben sich in der Regel für beide Anwendungen als effizienter erwiesen, aber die Inkubation von Zellen mit einer hohen Trypsinkonzentration oder über einen zu langen Zeitraum birgt die Gefahr, dass die Zellmembranen beschädigt werden und die Zellen absterben können. Die kultivierten Zellen werden am häufigsten durch Behandlung mit Trypsin in Kombination mit EDTA (Ethylendiamintetraessigsäure) vom Kultursubstrat entfernt, wobei die Trypsinkonzentration zwischen 0,025 % und 0,5 % liegen kann.
StableCell™ Trypsin-Lösungen werden entwickelt, um die Zellablösung wie bei Standard-Trypsinlösungen durchzuführen, ohne dass das Trypsin aliquotiert, gefroren und aufgetaut werden muss. Dadurch wird viel Zeit gespart, da das Aliquotieren und Warten auf das Auftauen von Trypsin für Zellpassagen oder Experimente entfällt und wertvoller Platz in den Gefrierschränken des Labors frei wird. Unsere StableCell™ Trypsinlösungen werden für eine Lagerung bei 2-8 °C empfohlen, aber unsere Studien zeigen, dass StableCell™ Trypsin auch bei einer Lagerung bei 37 °C zu > 90 % aktiv und leistungsfähig bleibt.
Kollagenase und Dispase
Collagenase spaltet die Peptidbindungen in nativem, dreifachhelikalem Kollagen. Aufgrund seiner einzigartigen Fähigkeit, natives Kollagen zu hydrolysieren, wird es häufig zur Isolation von Zellen aus tierischem Gewebe verwendet. Kollagenasen kommen in einer Vielzahl von Mikroorganismen und in vielen verschiedenen tierischen Zellen vor. Die wirksamste Form ist die "rohe" Kollagenase, die vom anaeroben Bakterium Clostridium histolyticum abgesondert wird.
Dispasen sind schnelle, wirksame, sanfte und neutrale Proteasen, die intakte Epithelflächen in Kultur vom Substrat trennen können. Dispase I wird für den Verdau von Lungengewebe und zur Aufbereitung von Zellen für Durchflussfärbung sowie zur Isolierung von CD4-T-Zellen der Maus verwendet.
Dissoziationsreagenzien für Spezialkulturen
Für die Dissoziation oder Ablösung von Zell- und Gewebetypen, die eine sanftere enzymatische Aktivität erfordern, werden in Accutase® und Accumax™ Lösungen effiziente Enzyme in niedrigerer Konzentration eingesetzt. Diese Lösungen:
- Lösen embryonale und neuronale Stammzellen effizient ab
- Lösen sanft, damit die Viabilität der Zellen erhalten und die Zellausbeute gesteigert werden kann
- Erfordern keine Neutralisierung
Einzelzellanalyse
Bei Gewebeproben braucht es für die Einzelzellanalyse lebensfähige Einzelzellen als Eingangsmaterial. Mittels dieser Analysen können Forscher Variationen in Zellkulturpopulationen für die Stammzell-, Krebs- und immunologische Forschung untersuchen. Entdecken Sie unsere hochwertigen Disassoziationsreagenzien, die für die Optimierung von Protokollen, die Entwicklung von Best Practices und die Generierung von zuverlässigen Einzelzellanalysedaten essenziell sind.
Zugehörige Produktressourcen
- Brochure: Enzymes for Cell Dissociation and Lysis
- Protokoll Zelldissoziation mit Trypsin
Trypsin wird üblicherweise verwendet, um adhärente Zellen von Oberflächen zu lösen. Es steht eine Vielzahl Trypsinlösungen zur Verfügung, damit spezifische Zelllinienanforderungen erfüllt werden können.
- Tissue Dissociation Guide: Collagenase, Dispase, and Liberase Enzyme Types
Collagenase Guide.Collagenases, enzymes that break down the native collagen that holds animal tissues together, are made by a variety of microorganisms and by many different animal cells.
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