P6782

Peroxidase aus Meerrettich

Type VI-A, essentially salt-free, lyophilized powder, 950-2000 units/mg solid (using ABTS), ≥250 units/mg solid (using pyrogallol)

• Synonym(e): Donor:hydrogen-peroxide oxidoreductase, Meerrettichperoxidase
• CAS-Nummer: 9003-99-0
• eCl@ss: 32160410
• UNSPSC Code: 12352204
• NACRES: NA.54
• EC Number: 232-668-6
• MDL number: MFCD00071339
• EG-Nummer: 1.11.1.7 (BRENDA, IUBMB)
• Specific activity: ≥250 units/mg solid (using pyrogallol), 950-2000 units/mg solid (using ABTS)

Eigenschaften

• type: Type VI-A
• Quality Segment: 300
• form: essentially salt-free, lyophilized powder
• specific activity: ≥250 units/mg solid (using pyrogallol), 950-2000 units/mg solid (using ABTS)
• mol wt: ~44 kDa
• solubility: 0.1 M phosphate buffer: soluble 10 mg/mL, clear, orange to red (pH 6.0), H₂O: soluble
• application(s): diagnostic assay manufacturing
• storage temp.: 2-8°C
• SMILES string: [O+H2]O[O-]
• InChI: 1S/H2O3/c1-3-2/h1-2H
• InChI key: JSPLKZUTYZBBKA-UHFFFAOYSA-N

Beschreibung

General description

Horseradish peroxidase (HRP) wird aus Meerrettich (Amoracia rusticana) Wurzeln isoliert und ist innerhalb der Peroxidasen der Gruppe der Ferroprotoporpyhrine zuzuordnen. HRP besteht aus einer einzelnen Polypeptidkette und entält vier Disulfidbrücken. Sie ist ein Glykoprotein mit einem Kohlenhydratanteil von 18%. Der Kohlenhydratanteil besteht aus Galactose, Arabinose, Xylose, Fucose, Mannose, Mannosamin und Galactosamin - in Mengenverhältnissen abhängig vom Isoenzym. Ihr Molekulargewicht (~44 kDa) setzt sich aus der Polypeptidkette (33,890 Daltons), dem Hemin plus Ca²⁺ (~700 Daltons) und der Glykosylierung (~9,400 Daltons) zusammen. Es existieren zumindest sieben Isoenzyme von HRP. Der isoelektrische Punkt von HRP ist in einem Bereich von pH 3 3.0 - 9.0.

Application

Meerrettichperoxidase (HRP) wird aus Meerrettichwurzeln (Amoracia rusticana) isoliert. Sie wird in biochemischen Anwendungen wie Western Blots, ELISA und Immunhistochemie eingesetzt. Meerrettichperoxidase wird zur Amplifikation eines schwachen Signals und zur Steigerung der Nachweisbarkeit eines Zielmoleküls, z. B. eines Proteins, verwendet. P6782 ist ein Produkt in Spitzenqualität vom Typ VI-A. Im Wesentlichen handelt es sich um ein salzfreies, lyophilisiertes Pulver. Es dient zur Quantifizierung von Cholesterin und Cholesterinestern[1] und zur In-vitro-Untersuchung von Lipidablagerungen auf Hydrogel- und Silikon-Hydrogel-Kontaktlinsen[2].

Das Enzym von Sigma wurde bei der Entwicklung eines raschen und empfindlichen Galaktose-Oxidase-Peroxidase-Biosensors für den Galaktosenachweis mit verlängerter Stabilität verwendet. Es ist ein Bestandteil einer Medienplatte (MRS-Agar) mit 3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidin (TMB) für das Wachstum von Lactobacillus sp. TMB agiert als chromogenes Peroxidasesubstrat. Peroxidase erzeugt O₂ aus H₂O₂, das von den Milchsäurebakterien produziert wird, und das TMB färbt die Kolonien in Anwesenheit von O₂ blau. Somit erscheinen die H₂O₂ produzierenden Kolonien nach 48-stündiger Inkubation bei 5 % CO₂ in der Luft auf MRS-Agar dunkelblau. Kolonien, die kein H₂O₂ produzieren, sind farblos.[3] Sie wird zur Untersuchung der stabilisierenden Wirkung von Polyvinylalkohol auf Meerrettichperoxidase eingesetzt. Sie wird auch zum Nachweis von Glucose und Peroxiden in Lösung verwendet.

Biochem/physiol Actions

Wenn Meerrettichperoxidase mit einem Substrat inkubiert wird, erzeugt sie ein farbiges, fluorimetrisches oder lumineszierendes Derivat des markierten Moleküls, wodurch die Quantifizierung ermöglicht wird. Meerrettichperoxidase verringert das Maß der Hemmung in einem mutierten cydAB leicht.

HRP kann leicht mit Wasserstoffperoxid (H₂O₂) kombiniert werden, und der resultierende [HRP-H₂O₂]-Komplex kann ein breites Spektrum an Wasserstoffdonatoren oxidieren. Der optimale pH-Wert beträgt 6,0–6,5 und das Enzym ist bei einem pH-Wert im Bereich von 5,0–9,0 am stabilsten. HRP kann durch verschiedene Verfahren an Antikörper konjugiert werden, bei denen Glutaraldehyd, Periodatoxidation oder Disulfidbindungen genutzt werden oder Amino- oder Thiol-gerichtete Vernetzungsmittel zum Einsatz kommen. Sie ist kleiner und stabiler als die Enzymmarkierungen β-Galactosidase und alkalische Phosphatase. Daher ist sie die begehrteste Markierung. Ihre Glykosylierung führt auch zu einer geringeren nichtspezifischen Bindung. Natriumazid, Cyanid, L-Cystein, Dichromat, Ethylenthioharnstoff, Hydroxylamin, Sulfid, Vanadat, p-Aminobenzoesäure sowie die Ionen Cd²⁺, Co²⁺, Cu²⁺, Fe³⁺, Mn²⁺, Ni²⁺ und Pb²⁺ wirken bekanntermaßen hemmend auf die Enzymaktivität.

Packaging

Abgepackt in mg Feststoff

Preparation Note

Lösungen dieses Produkts mit einer Konzentration von 1 mg/ml in 0,1 M Phosphatpuffer (pH-Wert 6,0) bleiben bei Raumtemperatur mindestens zwei Wochen lang aktiv. Die Aktivität der Lösung bleibt über 5 Gefrier-/Auftau-Zyklen hinweg erhalten.

Analysis Note

Die RZ (Reinheitszahl) ist das Absorptionsratio A₄₀₃/A₂₇₅ bestimmt bei 0.5-1.0 mg/ml in deionisiertem Wasser. Es ist ein Mass für den Hämingehalt, nicht für die Enzymaktivität. Selbst Zubereitungen mit hoher RZ können eine tiefe Enzymaktivität haben.

Dieses Produkt wird für einen einfachen Vergleich mit den Einheiten anderer Anbieter mit ABTS getestet: ca. 1.000 Einheiten pro mg Feststoff

Other Notes

Eine ABTS-Einheit oxidiert bei einem pH-Wert von 5,0 und einer Temperatur von 25 °C pro Minute 1 μmol ABTS.

Eine Pyrogalloleinheit bildet in 20 s bei einem pH-Wert von 6,0 und 20 °C 1 mg Purpurogallin aus Pyrogallol.

Weitere Informationen über Peroxidase finden Sie unter www.sigma-aldrich.com/enzymeexplorer.

ähnlich zu P8375

Sicherheitshinweise

• pictograms: GHS08
• signalword: Danger
• hcodes: H334
• pcodes: P261 - P284 - P501
• Hazard Classifications: Resp. Sens. 1
• Lagerklasse: 11 - Combustible Solids
• ppe: Eyeshields, Gloves, type N95 (US)