487663

p-Nitrophenylphosphat

This p-Nitrophenyl Phosphate is validated for use in ELISA.

• Synonym(e): Phosphate Ester, p-Nitrophenyl Ester
• UNSPSC-Code: 41116158
• NACRES: NA.25

Eigenschaften

• Qualitätsniveau: 100
• Form: liquid
• Enthält nicht: preservative
• Hersteller/Markenname: Calbiochem^®
• Lagerbedingungen: OK to freeze; protect from light
• Farbe: clearslightly yellow tint
• Versandbedingung: ambient
• Lagertemp.: 2-8°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

p-Nitrophenylphosphat ist das gebräuchlichste Substrat für ELISA-Tests auf Basis alkalischer Phosphatase. Durch Hydrolyse des Phosphatesters wird p-Nitrophenol freigesetzt, ein lösliches, gelbes Chromogen, das spektrophotometrisch bei 405 nm gemessen werden kann (ε; = 1,83 x 10⁴ M^-1cm^-1). Da die Reaktion linear verläuft, können kinetische Tests durchgeführt werden. Endpunkt-Bestimmungen können ebenfalls durchgeführt werden, indem die Reaktion mit einer starken Base gestoppt und die Absorbanz bei 405 nm gemessen wird. Dieses p-NPP-Präparat ist ein stabiles, praktisches, flüssiges Konzentrat in einem proprietären Lösungsmittel.

p-Nitrophenylphosphat, als 50-faches Konzentrat (0,19 mol/l) geliefert. Zur Verwendung mit p-NPP-Substratpuffer, Katalog-Nr. 487664.

Dieses p-Nitrophenylphosphat ist für die Verwendung in ELISA validiert.

Hervorragendes Substrat für ELISA-Tests auf Basis alkalischer Phosphatase. Erzeugt ein gelbes, lösliches Endprodukt, das bei 405 nm bis 410 nm interpretiert werden kann. Es können sowohl kinetische als auch Endpunkt-Bestimmungen durchgeführt werden. Wird als gebrauchsfertiges Produkt geliefert. Ein gebrauchsfertiges Verdünnungsmittel ist separat erhältlich (Katalog-Nr. <;A href="https://./?[islink]ViewProductDetail-BySKU&;#124;&;#124;SKU&;#124;EMD_BIO-487664&;#124;[/islink]">;487664<;/A>;).

Anwendung

ELISA

Biochem./physiol. Wirkung

Primärziel
Substrat für ELISA-Tests auf Basis alkalischer Phosphatase

Produkt konkurriert nicht mit ATP.

Warnhinweis

Toxizität: Standard-Handhabung (A)

Physikalische Form

Wird als 50-faches Konzentrat geliefert.

Rekonstituierung

Verwerfen, wenn die Lösung hellgelb oder trüb wird.

Sonstige Hinweise

Überprüfung der Funktionalität des Endprodukts im ELISA.



Empfohlenes Verfahren für die Verwendung von p-NPP in ELISAs auf Basis alkalischer Phosphatase:



1. 1-fache p-NPP-Substratlösung vorbereiten: Zu 39 Teilen dH₂O 1 Teil 50-faches p-NPP-Konzentrat und 10 Teile p-NPP-Substratpuffer (Katalog-Nr. 487664) hinzugeben. Gut mischen und vor Licht geschützt aufbewahren. Dieses verdünnte Reagenz ist nach der Zubereitung bis zu 10 Stunden verwendbar.



Hinweis: Das Produkt mit der Katalog-Nr. 487664 ist ein Puffer auf Basis von AMP (2-Amino-2-methyl-1-propanol). Andere Puffer, z. B. auf Basis von Diethanolamin (DEA) und 2-Amino-2-methyl-1,3-propandiol (AMPD), können ebenfalls verwendet werden.



2. Alle erforderlichen Inkubationen mit Antikörpern und mit Sonden, die mit alkalischer Phosphatase markiert sind, durchführen.

3. Die Platten-Wells mindestens 4-mal mit TRIS-gepufferter Kochsalzlösung (TBS), die 0,1 % Tween^®-20 Detergens enthält, waschen. KEINE PHOSPHATPUFFER VERWENDEN; anorganisches Phosphat ist ein potenter Inhibitor der alkalischen Phosphatase.

4. Nach dem letzten Waschvorgang schütteln und alle Pufferreste in den Wells abtupfen.

5. In jedes Well 100 µ;l 1-fache p-NPP-Substratlösung (hergestellt in Schritt 2) geben und 15–60 Minuten lang inkubieren. (Wenn eine kinetische Studie gewünscht wird, können Messungen bei 405 nm in Zwischenintervallen durchgeführt werden.)



[Hinweis: Die optimale Inkubationszeit hängt von der Menge des vorhandenen Enzyms ab. Wenn sich die Farbe zu schnell entwickelt, kann eine Verdünnung der Sonde, des Antikörpers oder des mit alkalischer Phosphatase markierten Reagenzes erforderlich sein.]



6. Die Reaktion durch Zugabe von 100 µ;l 1 N NaOH stoppen.

7. Die Absorbanz bei 405 nm ablesen.



Hinweis: Schwankungen bezüglich Zeit, Reagenzvolumen und Temperatur erfordern möglicherweise eine weitere Standardisierung durch den Anwender.

Rechtliche Hinweise

CALBIOCHEM is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

TWEEN is a registered trademark of Croda International PLC

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 3
• Flammpunkt (°F): Not applicable
• Flammpunkt (°C): Not applicable