A1978

Anti-β-Actin (ACTB) Antibody

mouse monoclonal, AC-15

• Synonym(e): Monoklonales Anti-β-Aktin
• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.41
• Conjugate: unconjugated
• Clone: AC-15, monoclonal
• Application: ARR, ICC, IF, IHC (f), WB
• Citations: 4100

Eigenschaften

• Produktname: Anti-β-Actin-Antikörper, Maus monoklonal, clone AC-15, purified from hybridoma cell culture
• biological source: mouse
• Quality Segment: 300
• conjugate: unconjugated
• antibody form: purified immunoglobulin
• antibody product type: primary antibodies
• clone: AC-15, monoclonal
• form: buffered aqueous solution
• mol wt: antigen 42 kDa
• species reactivity: sheep, carp, feline, chicken, rat, mouse, Hirudo medicinalis, rabbit, canine, pig, human, bovine, guinea pig
• should not react with: Dictyostelium discoideum
• technique(s): immunocytochemistry: 10-40 μg/mL using human foreskin fibroblasts, immunohistochemistry (frozen sections): suitable, indirect immunofluorescence: suitable, microarray: suitable, western blot: 0.5-1 μg/mL using cell extract of human foreskin fibroblasts or chicken fibroblasts.
• isotype: IgG1
• UniProt accession no.: P60709
• application(s): research pathology
• shipped in: dry ice
• storage temp.: −20°C
• target post-translational modification: unmodified
• Gene Information: human ... ACTB(60) ; mouse ... Actb(11461) ; rat ... Actb(81822)

Beschreibung

General description

Beim Anfärben von ultradünnen Kryo-Gewebeschnitten von Hühner-Kaumagen markiert der Antikörper die Verdichtungszonen (Dense Bodies) und Intermediärfilamente aus Desmin, die aufeinanderfolgende Dense Bodies verbinden, sowie die membranassoziierten Anheftungsplaques (Dense Plaques). Er färbt keine adulten Herz- und Skelettmuskeln an, außer in Spuren, wenn Kontaminationen der Probe mit anderen als Muskelzellen vorhanden sind, oder wenn embryonales Gewebe verwendet wird.

Das ACTB(β-Actin)-Gen ist auf dem humanen Chromosom 7p22.1 lokalisiert. β-Aktin ist das am häufigsten vorkommende Protein, das im Zytoplasma enthalten ist. ACTB wird ubiquitär exprimiert. Actin ist eines der am stärksten konservierten eukaryotischen Proteine und wird in Säugetieren und Vögeln exprimiert. Vier der Actin-Isoformen repräsentieren die Differenzierungsmarker von Muskelgewebe und zwei sind in fast allen Zellen zu finden. Der monoklonale Anti-β-Actin-Antikörper (Maus- IgG1-Isotyp) stammt vom AC-15-Hybridom. Dieses wird durch Fusion von Maus-Myelomzellen und Milzzellen von BALB/c-Mäusen hergestellt, die mit dem leicht modifizierten synthetischen zytoplasmatischen β-Actin N-terminalen Peptid Ac-Asp-Asp-Asp-Ile-Ala-Ala-Leu-Val-Ile-Asp-Asn-Gly-Ser-Gly-Lys immunisiert wurden, und ist an KLH konjugiert.
Beim Anfärben von ultradünnen Kryo-Gewebeschnitten von Hühner-Kaumagen markiert der Antikörper die Verdichtungszonen (Dense Bodies) und Intermediärfilamente aus Desmin, die aufeinander folgende Dense Bodies verbinden, sowie die membranassoziierten Dense Plaques. Er färbt keine ausgewachsenen Herz- und Skelettmuskeln an, außer in Spuren, wenn die Probe mit Nicht-Muskelzellen kontaminiert ist oder wenn embryonales Gewebe verwendet wird.

Immunogen

leicht modifiziertes β-zytoplasmatisches N-terminales Aktin-Peptid, Ac-Asp-Asp-Asp-Ile-Ala-Ala-Leu-Val-Ile-Asp-Asn-Gly-Ser-Gly-Lys, konjugiert mit KLH.

Application

Das Actin in Zellen verschiedener Spezies und aus unterschiedlichen Geweben weist sehr ähnliche immunologische und physikalische Eigenschaften auf. Aus diesem Grund ist es schwierig, wirksame Antiseren gegen dieses Protein herzustellen. Die Verfügbarkeit monoklonaler Antikörper gegen β-Actin stellt daher ein spezifisches und nützliches Hilfsmittel zur Untersuchung der intrazellulären Verteilung von β-Actin sowie der statischen und dynamischen Aspekte des Zytoskeletts bereit.
Der monoklonale Anti-Beta-Actin-Antikörper kann für Mikroarrays, indirekte Immunfluoreszenz und immunhistochemische Analysen eingesetzt werden. Außerdem wurde das Produkt in der Immunzytochemie bei 10-40 μg/ml mit menschlichen Vorhautfibroblasten eingesetzt. Der Antikörper wurde auch für Western Blots bei 0,5-1 μg/ml mit Zellextrakten menschlicher Vorhautfibroblasten oder Hühnerfibroblasten verwendet.
Der Antikörper kann zum Anfärben von Aceton-fixierten Gefrierschnitten, EM-Präparaten und Mikroinjektionsexperimenten verwendet werden. Als Fixiermittel können B5, Ethanol, Methacam oder Bouin′sche Lösung verwendet werden. Das von dem Antikörper erkannte Epitop ist resistent gegenüber Formalinfixierung und Paraffineinbettung.
Der Antikörper wurde in der Immunoblot-Analyse eingesetzt.

Der monoklonale Anti-Beta-Actin-Antikörper kann für Mikroarrays, indirekte Immunfluoreszenz und immunhistochemische Analysen eingesetzt werden. Außerdem wurde das Produkt in der Immunzytochemie bei 10-40 μg/ml mit menschlichen Vorhautfibroblasten eingesetzt. Der Antikörper wurde auch für Western Blots bei 0,5-1 μg/ml mit Zellextrakten menschlicher Vorhautfibroblasten oder Hühnerfibroblasten verwendet.
Der Antikörper kann zum Anfärben von Aceton-fixierten Gefrierschnitten, EM-Präparaten und Mikroinjektionsexperimenten verwendet werden. Als Fixiermittel können B5, Ethanol, Methacam oder Bouin′sche Lösung verwendet werden. Das von dem Antikörper erkannte Epitop ist resistent gegenüber Formalinfixierung und Paraffineinbettung.

Ein monoklonaler Maus-Anti-Aktin-Antikörper wurde als Beladungskontrolle für die Western-Blot-Analyse von Leberproteinlysaten aus Ratten verwendet.

Ein monoklonaler Maus-Anti-Aktin-Antikörper wurde als Beladungskontrolle für die Western-Blot-Analyse von immungefällten Proteinen aus Ratten-Spinalganglien-Co-Kulturen verwendet.

Biochem/physiol Actions

Der monoklonale Anti-β-Actin-Antikörper der Maus 1, 2 erkennt ein Epitop im N-terminalen Bereich der β-Isoform von Actin.

Die beiden an der Zellmotilität beteiligten Hauptproteine des Zytoskeletts sind Actin und Myosin. Actin und Myosin sind Bestandteile vieler Zelltypen und an Zellvorgängen wie Fortbewegung, Sekretion, Zytoplasmaströmung, Phagozytose und Zytokinese beteiligt.
ACTB (β-Actin) ist entscheidend für die Organogenese, insbesondere für die Gehirn-, Nieren- und Herzentwicklung. Es ist für die Aufrechterhaltung der Zellproliferation, -migration und -form verantwortlich. Actinprotein ist grundlegend für die Bildung reifer Thrombozyten. β−Actin spielt eine wichtige Rolle bei der Embryonalentwicklung. Die Hochregulierung von β-Actin stimuliert Membranprotrusionen und unterstützt die Zellmotilität. Das codierte Protein β-Actin vermittelt die Fibroblastenmigration in Mäusen und kontrolliert dadurch die Bindegewebsfestigung.
Actin ist ein Zytoskelett-Protein, das Zellvorgänge wie Motilität, Sekretion, Phagozytose und Zytokinese reguliert. Der NH2-Terminus von Aktin kann als Antigen fungieren. Dieser Terminus kann auch Aktin-Interaktionen modulieren und mit Proteinen wie Myosin assoziieren.

Physical form

Lösung in 0,01 M phosphatgepufferter Kochsalzlösung, pH 7,4, mit 15 mM Natriumazid.

Preparation Note

Lagerung und Stabilität: Für regelmäßige Verwendung bei 2-8 °C bis zu 1 Monat aufbewahren. Zur Langzeitlagerung in Arbeitsaliquoten bei -20 °C einfrieren. Wiederholtes Einfrieren und Auftauen oder die Aufbewahrung in „frostfreien“ Gefrierschränken wird nicht empfohlen. Falls nach längerer Lagerung eine leichte Trübung eingetreten ist, die Lösung vor der Verwendung durch Zentrifugieren klären. Nicht verwendete Arbeitsverdünnungen sollten nach 12 Stunden verworfen werden.

Other Notes

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