Downstream Processing viraler Vektoren
Aufreinigungsprozesse für virale Vektoren basierten in der Vergangenheit auf Systemen, die für monoklonale Antikörper verwendet wurden und nicht dafür ausgelegt sind, den erforderlichen Rückgewinnungsgrad zu erreichen.
Die Einführung neuer Technologien speziell für das Downstream Processing viraler Vektoren für Gentherapien eröffnet die Möglichkeit, Ertrag und Durchsatz zu steigern. Methoden, die für die Optimierung des Downstream Processing viraler Vektoren zur Verfügung stehen, sind unter anderem:
- Ultrafiltrations-/Diafiltrations-Verfahren, insbesondere unter Verwendung der Tangentialflussfiltration (TFF) zur Zell- oder Virusernte und -aufreinigung, zur Downstream-Proteinkonzentration und Diafiltration und in der Endformulierung
- Intensivierte Chromatographie-Prozesse durch Technologien wie hochproduktive Einweg-Chromatographie-Membranadsorber, die Anzahl und Umfang der Grundoperationen reduzieren
Diese Downstream-Technologien haben das Potenzial, die Aufreinigungszeiten viraler Vektoren von Stunden auf Minuten zu verkürzen und gleichzeitig die Rückgewinnung zu verbessern. Außerdem können sie die Skalierung erleichtern, den Process Footprint verkleinern und eine effizientere Nutzung der Einrichtung ermöglichen.
Weitere technische Informationen
- /AT/de/technical-documents/technical-article/pharmaceutical-and-biopharmaceutical-manufacturing/viral-vector-downstream-processing/scalable-tangential-flow-filtration-downstream-processing
- /AT/de/technical-documents/technical-article/pharmaceutical-and-biopharmaceutical-manufacturing/gene-therapy-manufacturing/removing-dna-and-rna-using-benzonase-endonuclease-during-viral-production
- /AT/de/technical-documents/technical-article/pharmaceutical-and-biopharmaceutical-manufacturing/gene-therapy-manufacturing/strategies-separation-analysis-empty-filled-capsids
- Shear ignorance? Think again: Breaking the perception of shear within viral vector manufacturing
In dieser Podcast-Mitschrift werden Best Practices – und häufige Missverständnisse – bei der Festlegung der Prozessbedingungen und der Nutzung verschiedener TFF-Geräteformate diskutiert.
- Pellicon® Capsules versus Hollow Fibers for Ultrafiltration/Diafiltration (UF/DF) in Viral Gene Therapy Manufacturing
Dieser Anwendungshinweis erläutert die Methodik und die experimentellen Ergebnisse der Leistungsbewertung von Pellicon®-Kapsulen gegenüber Hohlfasern für die UF/DF viraler Vektoren und beschreibt die Auswirkung beider Filtertypen auf den TFF-Prozess.
- /deepweb/assets/sigmaaldrich/marketing/global/documents/352/641/pellicon-capsule-aav-ot11666en-ms.pdf
Als Teil der linear skalierbaren Pellicon®-Familie von TFF-Filtern bieten Pellicon®-Einwegkapsulen und Pellicon® XL 50-Scale-Down-Kassetten Zuverlässigkeit und Reproduzierbarkeit in jeder Phase Ihres AAV-Prozesses, von der Entwicklung bis zur Herstellung.
- /deepweb/assets/sigmaaldrich/marketing/global/documents/987/212/pellicon-capsule-vgt-tb11669en-ms.pdf
In dieser technischen Kurzanleitung erörtern wir den Einsatz unserer neuen Single-Use-Technologie für die Tangentialflussfiltration (TFF) viraler Vektoren im Rahmen der Evaluierung zweier TFF-Betriebssteuerungsstrategien.
- /deepweb/assets/sigmaaldrich/marketing/global/documents/407/540/podcast-empty-full-separation-ot9653en-ms.pdf
Dieser Artikel erklärt die Notwendigkeit eines differenzierteren Verständnisses von AVV-Capture und Empty-Full-Separation sowie die Trends, die die Innovation in diesem Bereich vorantreiben.
Primäre Klärfiltration
Das Rohmedium mit viralen Vektoren wird mittels Tiefenfiltration oder einer Kombination aus Zentrifugation und Tiefenfiltration gereinigt, um große Zelltrümmer und andere Kontaminationen zu entfernen.
Sekundäre Klärfiltration
Das geklärte Medium aus der primären Klärfiltration wird in zusätzlichen Schritten weiter gereinigt.
Ultrafiltration/Diafiltration
Ultrafiltration und Diafiltration werden zur Konzentrierung bzw. zum Pufferaustausch eingesetzt. Der virale Vektor wird mittels Größenfiltration von Verunreinigungen befreit. Die Diafiltration entfernt Salze und andere Moleküle durch Austausch mit dem gewählten Puffer.
Chromatographie
Es werden mindestens zwei Chromatografieverfahren verwendet, um den viralen Vektor zu reinigen, unter anderem Ionenaustausch-, Affinitäts- und Größenausschlusschromatographie.
Virusfiltration
Der gereinigte virale Vektor wird einer Nanofiltration mit 15 Nanometer großen Poren unterzogen, um Adventiv-Viren, Endotoxine und andere verbliebene Verunreinigungen und Aggregate zu entfernen.
Sterilfiltration
Sterilfiltration, oder Keimbelastungsreduzierung, kann in dem Prozess mehrere Male durchgeführt werden. Der Feed-Strom wird durch einen Sterilfilter mit einer Porengröße von 0,4- oder 0,2-Mikrometer geleitet, um Bakterien und andere Mikroorganismen zu entfernen, die während des Prozesses eingebracht wurden.
Endabfüllung
Der gereinigte und sterile virale Vektor wird in den dafür vorgesehenen Endbehälter gefüllt. Hierbei sind besonders die Formulierung, das Verpackungsmaterial und die Lagerbedingungen zu berücksichtigen, damit die Stabilität und Unversehrtheit gewahrt bleiben.
Workflow
Upstream Processing viraler Vektoren
Die richtigen Entscheidungen im Upstream-Prozess haben nicht nur Auswirkungen auf den Virusvektor-Titer, sondern auch auf die Downstream-Prozesse, Zeitpläne und Akzeptanz durch die Zulassungsbehörden
Formulierung und Endabfüllung viraler Vektoren
Die Formulierung einer kommerziell nutzbaren Gentherapie erfordert ein hohes Maß an Erfahrung in der Anwendung gepaart mit regulatorischem Know-how
Charakterisierung viraler Vektoren und Biosicherheitsprüfungen
Kritische Biosicherheitsprüfungen und die Charakterisierung von Virusvektorprodukten können dabei helfen, die Schlüssel-Qualitätsmerkmale Identität, Wirksamkeit, Sicherheit und Stabilität vollständig zu analysieren
Auftragsentwicklung und -herstellung viraler Vektoren
CDMO-Partnerschaften spielen eine entscheidende Rolle beim Voranbringen klinischer Pipelines und bei der erfolgreichen Kommerzialisierung
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