Direkt zum Inhalt
Merck
HomeProdukteMolekularbiologie & funktionelle GenomikKlonierung & ExpressionMolekulare Klonierung & Proteinexpression

Molekulare Klonierung & Proteinexpression

Die Abbildung in Form eines Diagramms veranschaulicht den Prozess der Proteinexpression, beginnend mit einem Expressionsplasmid und endend mit dem Phänotyp, einschließlich der Schritte Transkription im Zellkern, Translation und Lokalisierung, gefolgt von der abschließenden Aufreinigung. Das Diagramm ist farblich codiert, dabei steht die Farbe Pink für den Gesamtprozess und Gelb für den Zellkern. Es enthält Bezeichnungen wie „Expressionsplasmid“, „Kern“, „Transkription“, „mRNA“, „Translation“, „Phänotyp“, „Lokalisierung“ und „Reinigung“

Ziel der molekularen Klonierung ist es, ein Gen von Interesse (GOI) in einen Plasmidvektor einzubauen. Hierbei handelt es sich um ein kreisförmiges Stück DNA, das verschiedene Elemente enthält, die das Klonen, die Klonselektion und die Proteinexpression erleichtern. Häufig verwenden Forscher DNA-Restriktionsenzyme und Ligase, um das GOI unter Beibehaltung des Leserasters (in-frame) in den Expressionsvektor für die anschließende Proteinexpression einzubauen. Dieser Vektor wird anschließend in eine Zelle eingebracht, die das vom GOI kodierte Protein exprimiert, oder die Proteinexpression wird mithilfe von zellfreien Proteinsynthesesystemen erzielt.   

Sobald das Protein exprimiert wird, kann die Proteinfunktion untersucht werden, da sie die Zellsignalgebung, Morphologie und andere Aspekte innerhalb der Zelle beeinflusst. Alternativ dazu kann das Protein in großen Mengen exprimiert, aufgereinigt und in zahlreichen Downstream-Anwendungen eingesetzt werden. Weiterführende Informationen finden Sie in unserem umfassenden Angebot an bewährten Reagenzien und Informationsmaterial für den gesamten Klonierungs- und Expressionsablauf für Insekten-, Bakterien- und Säuger-Proteinexpressionssysteme.

Lesen Sie mehr über

Zugehörige Produktinformationen

Restriktionsenzyme und DNA-modifizierende Enzyme

Bei der molekularen Klonierung verwenden Forscher häufig zwei Arten von Enzymen – Restriktionsenzyme zum Schneiden der DNA und modifizierende Enzyme, um Nukleinsäuremodifikationen vorzunehmen, häufig vor dem Ligationsschritt. Entdecken Sie unser breites Angebot an Restriktionsenzymen und anderen modifizierenden Enzymen wie alkalische Phosphatase, Protease, T7-RNA-Polymerase, Ribonuklease A und T4-DNA-Ligase für Ihren gesamten Forschungsbedarf.

Zellfreie Expressionssysteme und Expressionsvektoren mit CMV-Promotoren und FLAG®-Markierungstechnologie

Unser Klonierungs- und Expressionsportfolio macht die Gentechnik kostengünstiger und effizienter, indem es eine Sammlung vielseitiger Vektoren mit optimierten Protokollen und Klonierungskits bietet. Wählen Sie aus unserem breiten Angebot an Klonierungs- und Expressionssystemen, darunter unser zellfreies Proteinsynthese- oder Expressionssystem, wie z. B. das Next Generation Kit für zellfreie Proteinexpression (Weizenkeim) (Produkt-Nr. CFPS700) und das ALiCE® Kit (Art. Nr. AL0103000). Entdecken Sie außerdem die bakteriellen und Säuger-FLAG® Expressionsvektoren für die periplasmatische oder cytoplasmatische Expression in transienten oder stabilen Transfektionssystemen und exprimieren Sie Ihre FLAG®- oder 3X-FLAG®-Sequenz sicher am N- oder C-Terminus mit einer Enterokinase (Ek)-Schnittstelle, um das Fusions-Tag bei Bedarf zu entfernen.

Novagen® pET-System, SnapFast™ Vektoren, Simplicon™ Vektoren und UCOE™-Proteinexpressionssysteme

Alle E. coli-Expressionsvektoren und Insektenexpressionsvektoren verleihen Ampicillin-Resistenz für eine einfache Auswahl positiver Transformanten. Entdecken Sie das Novagen® pET System, den Goldstandard für die Klonierung und Expression rekombinanter Proteine in bakterieller Expression. Die von Oxford Genetics entwickelte SnapFast™ Vektorfamilie bietet ein schnelles und einfaches Protokoll, das den Transfer eines GOI von einem Vektor in einen anderen unter Verwendung der SnapFast™ Schnittstellen ermöglicht und Vektoren erzeugt, die mit Expressionssystemen von Insekten, Hefen, Bakterien und Säugern kompatibel sind. Mit unserer Ubiquitous Chromatin Opening Element (UCOE™)-Expressionsvektortechnologie kann in stabil transfizierten Säugerzellen in weniger als 30 Tagen Protein im Grammbereich produziert werden. Die UCOE™-Expressionstechnologie verhindert die Stummschaltung von Transgenen und ermöglicht eine konsistente, stabile und hochwertige Genexpression, die bis zu 20-mal höher ist als bei herkömmlichen Vektoren, unabhängig von der chromosomalen Integrationsstelle. Das Simplicon™ In-vivo-Proteinexpressionssystem ist ein nicht genomintegrierendes, abstimmbares und synthetisches, selbstreplizierendes RNA-basiertes Expressionssystem, mit dem eine sofortige, hoch nachhaltige Proteinexpression mehrerer Gene in transfizierte menschliche Zellen ohne das Risiko der Genomintegration erzeugt wird. Weitere Informationen finden Sie in unserem Video Simplicon™ technology utilized for efficient human iPSCs generation.

Reagenzien und Ressourcen für die Transformation von Bakterien und Hefen

Bei der Bakterientransformation wird fremde DNA mit Methoden wie Hitzeschock und Elektroporation in Bakterien eingebracht. Unser Portfolio an kompetenten Zellen wurde für eine optimale Proteinexpression sogar für die anspruchsvollsten rekombinanten Proteine entwickelt. In unserem Leitfaden zur Auswahl kompetenter Zellen Competent Cell Selection Guide finden Sie eine Vielzahl neuer kompetenter bakterieller Zellen für eine breite Palette von Anwendungen, darunter Proteinexpression, routinemäßiges oder schwieriges Klonen und Bibliothekerstellung. Darüber hinaus hat die rekombinante Proteinexpression in Saccharomyces cerevisiae viele Vorteile, wie z. B. einfache Protokolle, die Verwendung von Basisreagenzien und Skalierbarkeit. Entdecken Sie die vielen Produkte, die für die Hefetransformation als Teil des Ablaufs der Proteinexpression zur Verfügung stehen. Unsere NovaBlue® kompetenten Zellen, die für Transfektionseffizienz und Plasmidkonservierung optimiert sind, unterstützen hervorragende Bibliothekenvorbereitungen und Plasmidstabilität. Darüber hinaus sind die kompetenten Zellen von Novagen® so konzipiert, dass sie eine korrekte Proteinfaltung, eine erhöhte Löslichkeit oder die Expression zytotoxischer Proteine erleichtern. Die beliebtesten Marken sind die Systeme Rosetta™, Origami™ und Overnight Express™.

Zugehörige Produktkategorien
PCR-Reagenzien & -Kits
Meistern Sie die PCR für Ihre Forschung: Mit unseren Reagenzien können Sie DNA exponentiell amplifizieren – für Genanalysen, Sequenzierungen, Mutagenese und viele weitere Anwendungen.
PCR-Bedarf & -Geräte
PCR-Röhrchen, Spitzen, Filterspitzen, Platten, Plattenversiegelungen, PCR-Thermocycler und weitere Verbrauchsmaterialien zur Unterstützung Ihres PCR-Workflows.
Transfektion
Transfektionsreagenzien, Protokolle und Ressourcen, darunter Roche X-tremeGENE-Transfektionsreagenzien für DNA, siRNA, miRNA und CRISPR/Cas9-Komponenten für die Geneditierung.
FLAG-Aufreinigung
Expressionsvektoren, Affinitätsharze und Antikörper für die Expression, Aufreinigung und den Nachweis von FLAG® markierten Fusionsproteinen.
Nukleinsäureaufreinigung
Reagenzien und Kits für die Extraktion und Aufreinigung von DNA und RNA sowie die Reaktionsbereinigung.
Oligos, qPCR-Sonden & Peptide
Wählen Sie aus maßgeschneiderten Produkten unseres umfassenden Portfolios an DNA- und RNA-Oligos, qPCR-Sonden und Peptiden. Wir bieten zahlreiche Optionen für Herstellungsplattformen, Reinheitsgrade und Modifikationen, um einer Vielzahl von Forschungsanwendungen zu entsprechen.
Nukleinsäure-Elektrophorese & -Hybridisierung
Werkzeuge für die Genomanalyse zum Nachweis und zur Quantifizierung von DNA und RNA, darunter Nukleinsäurefärbemittel, Probenladepuffer, vorgefertigte Agarosegele, Transfermembranen sowie Biotin, Fluorescein und DIG als RNA- und DNA-Markierungsreagenzien.
Plasmid-DNA-Aufreinigung
Vereinfachen Sie die Aufreinigung von Plasmid-DNA mithilfe von Kits in verschiedenen Größen. Ideal für den Bedarf bei Klonierung und Proteinexpression.
Zugehörige Anwendungen
Nukleinsäure-Gelelektrophorese
Grundlagen der DNA- und RNA-Gelelektrophorese und wie diese Verfahren eingesetzt werden können, um DNA- und RNA-Moleküle nach Größe und Ladung für die Klonierung, PCR, Massenspektrometrie, das Next Generation Sequencing (NGS) sowie Northern und Southern Blots aufzutrennen und aufzureinigen.
Western Blotting
Ein Überblick über die Grundsätze und Anwendungen des Western Blotting zum Nachweis von Proteinen. Enthält Links zu detaillierten Protokollen, Videos und anderen Ressourcen für die Proteinextraktion, die Gelelektrophorese, den Transfer auf PVDF- oder Nitrozellulose-Membranen sowie chemilumineszente, kolorimetrische und Fluoreszenznachweisverfahren.
Enzymgekoppelter Immunabsorptionsassay (ELISA)
Enzymgekoppelte Immunabsorptionsassays (ELISA) umfassen direkte, indirekte und Capture (Sandwich) Nachweisformate zur Identifizierung und Quantifizierung eines spezifischen Antigens.
DNA- & RNA-Aufreinigung
Überblick über gebräuchliche Techniken und Downstream-Anwendungen für die Extraktion und Aufreinigung genomischer DNA, Plasmid-DNA und Gesamt-RNA aus Zellen, Gewebe, Blut, Viren und anderen Probenarten.
PCR-Anwendungen
Die Polymerasekettenreaktion (PCR) ist eine Methode zur Amplifikation von Nukleinsäuremolekülen und wird häufig in verschiedenen Anwendungen wie RT-PCR, Heißstart-PCR und Endpunkt-PCR eingesetzt.
Proteinkonzentration & Pufferaustausch
Überblick über Methoden zur Konzentrierung und Klärung von Proteinproben für Aufreinigungs-, Bioprocessing- und Analyseverfahren. Mit Protokollen und Videos zu Filtrations- und Ultrafiltrationstechniken, Proteinanreicherung, Entsalzung und Pufferaustausch mittels Dialyse, Diafiltration und Chromatographiemethoden.
Proteinexpression
Technologien zur Expression rekombinanter Proteine in E. coli-, Insekten-, Hefen- und Säuger-Expressionssystemen für die Grundlagenforschung und zur Unterstützung der Therapeutika- und Impfstoffproduktion.
Proteinaufreinigung
Proteinaufreinigungsverfahren, Reagenzien und Protokolle zur Aufreinigung rekombinanter Proteine unter Anwendung von Methoden wie Ionenaustausch, Größenausschluss und Proteinaffinitätschromatographie.
Melden Sie sich an, um fortzufahren.

Um weiterzulesen, melden Sie sich bitte an oder erstellen ein Konto.

Sie haben kein Konto?