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KOD DNA-Polymerase

High fidelity DNA polymerase designed for accurate PCR amplification of DNA templates for general cloning and cDNA amplification applications.

• Synonym(e): High fidelity PCR, High fidelity polymerase, KOD polymerase
• UNSPSC-Code: 41106314
• NACRES: NA.54

Eigenschaften

• Rekombinant: expressed in E. coli
• Qualitätsniveau: 100
• Assay: ≥90% (homogenous band, SDS-PAGE)
• Verwendung: sufficient for 250 reactions
• 5′ exonuclease activity: <2%, 74 °C (1 h incubation in a reaction with 5′-labeled λ/Sca I digest, per unit enzyme)
• secondary activity: nicking (none detected)
• Leistungsmerkmale: Difficult Templates/Specialty Enzymes PCR; High Fidelity PCR; dNTPs included; hotstart: no
• Hersteller/Markenname: Novagen^®
• Lagerbedingungen: OK to freeze
• Konzentration: 2.5 unit/μL
• Methode(n): PCR: suitable
• Aufnahme: purified DNA
• Eignung: suitable for PCR
• Versandbedingung: wet ice
• Lagertemp.: −20°C
• Angaben zum Gen: Thermococcus kodakaraensis ... TK_RS00010(3233723)

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Die PCR beinhaltet die Replikation eines DNA-Templates durch eine thermostabile DNA-Polymerase. Die Prozessivität, Spezifität und Wiedergabetreue des verwendeten Polymerase-Enzyms können die Effizienz, Reproduzierbarkeit und Ausbeute der PCR-Reaktion beeinflussen. Bei der High-Fidelity-PCR wird eine DNA-Polymerase mit einer geringen Fehlerrate eingesetzt und somit ein hoher Genauigkeitsgrad der Replikation der Ziel-DNA erreicht. Die Genauigkeit ist entscheidend, wenn die genaue Sequenz-Amplifikation des Zielgens notwendig ist, beispielsweise bei direkter Sequenzierung oder Klonierung zur Downstream-Proteinexpression. Untersuchungen können durch unerwünschte Mutationen gravierend beeinträchtigt werden.

Unsere Analyse hat gezeigt, dass KOD-Enzyme eine gute Wahl für eine schnelle und genaue PCR mit hoher Ausbeute sind. Unsere Molekularbiologen arbeiten an der Entwicklung und Formulierung von Polymerasen mit der höchsten Spezifität, Wiedergabetreue und Ausbeute bei der PCR-Amplifikation. Weiterhin erhöhen optimierte Pufferzusammensetzungen sowie praktische Master-Mixe und Zyklierungsparameter die Benutzerfreundlichkeit und Reproduzierbarkeit der Daten. Die KOD DNA-Polymerase (vormals KOD HiFi DNA-Polymerase) ist eine rekombinante Form der Thermococcus kodakaraensis KOD1 DNA-Polymerase. KOD ist eine thermostabile DNA-Polymerase, die die Ziel-DNA bis zu 6 kbp mit höchster Genauigkeit und Ausbeute für PCR-Anwendungen amplifiziert. Die 3′→5′ exonukleaseabhängige Korrekturleseaktivität des Enzyms führt zu einer niedrigeren PCR-Mutationsfrequenz als alle anderen handelsüblichen DNA-Polymerasen. Die Verlängerungsrate ist 5 Mal höher bzw. die Prozessivität ist 10 bis 15 Mal höher als die der Pfu DNA-Polymerase, was bei einer kurzen Reaktionszeit zu einer höheren Genauigkeit und stabileren Ausbeute führt. Das Enzym erzeugt stumpfendige PCR-Produkte, die für das Klonen mit den Kits Novagen Perfectly Blunt^® und LIC Vector geeignet sind.

Anwendung

KOD DNA-Polymerase wird in der Polymerase-Kettenreaktion (PCR) mit hoher Wiedergabetreue zum Amplifizieren der gewünschten SARS-CoV-2-N-Konstrukte eingesetzt.

Leistungsmerkmale und Vorteile

• Höhere Wiedergabetreue als die Pfu DNA-Polymerase, ausgezeichnet zum Klonen
• Doppelt so schnelle Extensionsgeschwindigkeit der Ausbeute im Vergleich zu Taq DNA-Polymerase und fünf Mal schneller als Pfu DNA-Polymerase
• Höhere Prozessivität sequenzieller Nukleotidpolymerisation, beträgt das 10- bis 15-Fache der von Pfu und Tli DNA-Polymerasen
• Amplifiziert Plasmid- und Lambda-DNA-Templates bis zu 6 kbp
• Amplifiziert genomische DNA-Templates bis zu 2 kbp
• Keine verkürzten Amplifikationsprodukte

Komponenten

• 250 U KOD DNA-Polymerase (2,5 U/μL)
• 1 mL 10X Puffer Nr. 1 für KOD DNA-Polymerase (pH 8,0)
• 1 mL 10X Puffer Nr. 2 für KOD DNA-Polymerase (pH 8,8)
• 1 mL 25 mM MgCl
• 1 mL dNTP-Gemisch (je 2 mM)

Warnhinweis

Toxizität: Standard-Handhabung (A)

Einheitendefinition

Eine Einheit ist definiert als die Enzymmenge, die die Umsetzung von 10 nmol dNTP in eine in Säure unlösliche Form in 30 Minuten bei 75°C in einer Reaktion katalysiert, die 20 mM Tris-HCl (pH-Wert 7,5 bei 25°C), 8 mM MgCl₂, 7,5 mM DTT, 50 µg/mL BSA, jeweils 150 µM dATP, dCTP, dGTP, dTTP (eine Mischung aus unmarkiertem und [³H]dTTP) und 150 µg/mL aktivierte Kalbsthymus-DNA enthält.

Rechtliche Hinweise

Der Kauf dieses Produkts schließt eine Immunität gegen eine Klage unter den in der Produktbeilage angegebenen Patenten ein, wonach nur die erworbene Menge für die internen Forschungszwecke des Käufers verwendet werden darf. Es werden keine anderen Patentrechte (wie z. B. 5′-Nukleaseprozess-Patentrechte) übertragen, weder ausdrücklich noch implizit noch durch Rechtsverwirkung. Weitere Informationen über den Erwerb von Lizenzen erhalten Sie vom Director of Licensing, Applied Biosystems, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California, 94404, USA.

NOVAGEN is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Perfectly Blunt is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS07
• Signalwort: Warning
• H-Sätze: H319 - H412
• P-Sätze: P264 - P273 - P280 - P305 + P351 + P338 - P337 + P313 - P501
• Gefahreneinstufungen: Aquatic Chronic 3 - Eye Irrit. 2
• Lagerklassenschlüssel: 10 - Combustible liquids
• WGK: WGK 2