07-473

Anti-trimethyl-Histon H3-(Lys4-)Antikörper

Upstate^®, from rabbit

• Synonym(e): H3K4me3, Histone H3 (tri methyl K4), H3 histone family, member T, histone 3, H3, histone cluster 3, H3
• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.41
• eCl@ss: 32160702
• Clone: polyclonal
• Species reactivity: human
• Application: ChIP, DB, ICC, WB
• Citations: 1097

Eigenschaften

• biological source: rabbit
• Quality Level: 100
• antibody form: affinity isolated antibody
• antibody product type: primary antibodies
• clone: polyclonal
• mol wt: (~17 kDa observed; 15.51 kDa calculated.. Uncharacterized bands may be observed in some lysate(s).)
• purified by: affinity chromatography
• species reactivity: human
• species reactivity (predicted by homology): vertebrates (based on 100% sequence homology.)
• manufacturer/tradename: Upstate^®
• technique(s): ChIP: suitable (ChIP-seq), dot blot: suitable, immunocytochemistry: suitable, western blot: suitable
• NCBI accession no.: NM_003493
• UniProt accession no.: Q16695
• shipped in: wet ice
• target post-translational modification: trimethylation (Lys4)
• Gene Information: human ... H3C1(8350)

Beschreibung

General description

Anti-Trimethyl-Histon H3 (Lys4), Best.-Nr. 07-473, ist ein polyklonaler Kaninchen-Antikörper zum Nachweis von an Lysin 4 trimethyliertem Histon H3 und wurde zur Verwendung in ChIP, Dot Blot, der Immunhistochemie und in Western Blots getestet.

Aufgereinigter polyklonaler Kaninchen-Antikörper in Puffer mit 0,1 M Tris-Glycin (pH-Wert 7,4), 150 mM NaCl mit 0,05 % Natriumazid

Histon H3.1t (UniProt: Q16695; auch als H3/t, H3t, H3/g bekannt) wird durch das Gen HIST3H3 (auch bekannt als H3FT) (Gen-ID: 8290) in Menschen kodiert. Histone sind hochgradig konservierte basische Zellkernproteine, die für die Nukleosomstruktur von Chromatin in Eukaryoten verantwortlich sind. Sie spielen eine zentrale Rolle bei der Transkriptionsregulation, DNA-Reparatur, DNA-Replikation und Chromosomenstabilität. Zwei Moleküle jedes der vier Kernhistone (H2A, H2B, H3 und H4) bilden ein Oktamer, das mit sich wiederholenden Einheiten von DNA, sogenannten Nukleosomen, umwickelt ist, was die DNA-Zugänglichkeit zu den zellulären Mechanismen einschränkt, die DNA als Template benötigen. Histon H3 besitzt eine kugelförmige Hauptdomäne und ein langes N-terminale Ende, das aus dem kugelförmigen Kern des Nukleosoms herausragt und durch verschiedene epigenetische Modifikationen, die einen Einfluss auf Zellprozesse haben, verändert werden kann. Die N-terminalen Enden von Histonproteinen unterliegen posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Phosphorylierung, Acetylierung und Methylierung, die nachgeschaltete regulatorische Faktoren rekrutieren, die Chromatinstruktur beeinflussen und die Transkription entscheidend beeinflussen. Histon H3 kann durch Histon-Acetyltransferasen an mehreren Lysinresten im Histonende acetyliert werden. Die Acetylierung wird im Allgemeinen mit der Transkriptionsaktivität in Verbindung gebracht, und die Methylierung von Lysin- und Argininresten kann je nach modifiziertem Rest entweder aktivierend oder repressiv wirken. Trimethylierung von Histon H3 ist einer der am meisten untersuchten epigenetischen Marker. H3K4me3-Modifikationen treten Berichten zufolge durchweg an Transkriptionsstartstellen auf, und die H3K4me3-Domäne wird mit einer höheren Transkriptionsaktivität und Zellidentität in der Präimplantationsentwicklung und im Prozess der Ableitung embryonaler Stammzellen aus der inneren Zellmasse und von Trophoblasten-Stammzellen aus dem Trophektoderm in Verbindung gebracht. (Literatur: Sharifi-Zarchi, A., et al. (2017). BMS Genomics. 18; Artikel 964; Liu, X., et al. (2016). Nature. 537(7621); 558-562).

Immunogen

Epitop: Trimethyliert (Lys4)

KLH-konjugiertes lineares Peptid, das 10 Aminosäuren der N-terminalen Region des humanen, an Lysin 4 trimethyliertem Histon H3 entspricht.

Application

ChIP-Analyse:
Ein unabhängiges Labor hat gezeigt, dass dieser Antikörper bei der Chromatin-Immunpräzipitation (ChIP) wirksam ist.
Dot-Blot-Analysis: Mit einer 1:10.000-Verdünnung einer repräsentativen Charge wurde Trimethyl-Histon H3 (Lys 4) in einem Absurance Histon H3-Antikörperspezifitäts-Array (Best.-Nr. 16-667) und einem Absurance Histon H2A-, H2B-, H4-Antikörperspezifizitäts-Array (Best.-Nr. 16-665) nachgewiesen.
ChIP-seq-Analyse:
Die Chromatin-Immunpräzipitation wurde mit dem Magna ChIP HiSens-Kit (Best.-Nr. 17-10460), 1 µl Anti-Acetyl-Histon H3 (Lys4)-Antikörper (Best.-Nr. 07-473), 20 µl Protein A/G-Beads und 1E6 vernetztem HeLa-Zellen-Chromatin durchgeführt, gefolgt von einer DNA-Aufreinigung mit magnetischen Beads. Aus Input- und ChIP-DNA-Proben wurden unter Verwendung von Standardprotokollen mit barcodierten Illumina-Adaptern Bibliotheken erstellt und auf dem Illumina HiSeq-Instrument analysiert. Ein Übermaß von 18 Millionen Reads von FastQ-Dateien wurden nach der Entfernung des TagDust-Tags (http://genome.gsc.riken.jp/osc/english/dataresource/) mit Bowtie (http://bowtie-bio.sourceforge.net/manual.shtml) kartiert. Peaks wurden mit MACS (http://luelab.dfci.harvard.edu/MACS/) identifiziert, wobei Peaks und Reads im UCSC Genome Browser (http://genome.ucsc.edu) von BigWig und BED-Dateien als benutzerdefinierter Track dargestellt werden. Die höchsten 25 % der identifizierten Peaks in Datensatz 07-473 zeigten eine Überlappung von 99 % mit Peaks, die im Track ENCODE H3K4me3 BROAD Histone für HeLa-S3 identifiziert wurden.

Anti-Trimethyl-Histon H3 (Lys4), Best.-Nr. 07-473, ist ein polyklonaler Kaninchen-Antikörper zum Nachweis von an Lysin 4 trimethyliertem Histon H3 und wurde zur Verwendung in ChIP, Dot Blot, der Immunhistochemie und in Western Blots getestet.

Forschungskategorie
Epigenetik und Zellkernfunktion

Forschungsunterkategorie
Histone

Biochem/physiol Actions

Dieser polyklonale Kaninchen-Antikörper dient zum spezifischen Nachweis von an Lysin 4 trimethyliertem Histon H3 (H3Kme3).

Physical form

Affinitätsgereinigt

Affinitätsgereinigter polyklonaler Kaninchen-Antikörper in Puffer mit 0,1 mol/l Tris-Glycin (pH-Wert 7,4), 150 mmol/l NaCl mit 0,05 % Natriumazid.

Preparation Note

Bei 2–8 ºC 1 Jahr ab Empfangsdatum haltbar.

Analysis Note

Kontrolle
HeLa-Zellkernextrakte

Mittels Western Blot an säureextrahierten HeLa-Zellkernaufbereitungen (positiv) und rekombinantem Histon H3 (negativ) beurteilt.

Western-Blot-Analyse:
Eine 1:5.000–1:10.000-Verdünnung dieses Antikörpers wurde verwendet, um trimethyliertes Histon H3 (Lys4) in sauren HeLa-Zellkernextrakten nachzuweisen.

Other Notes

Ersetzt: 04-791

Legal Information

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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