P8250

Peroxidase aus Meerrettich

Type II, essentially salt-free, lyophilized powder, 150-250 units/mg solid (using pyrogallol)

• Synonym(e): Donor:hydrogen-peroxide oxidoreductase, Meerrettichperoxidase
• CAS-Nummer: 9003-99-0
• eCl@ss: 32160410
• UNSPSC Code: 12352204
• NACRES: NA.54
• EC Number: 232-668-6
• MDL number: MFCD00071339
• EG-Nummer: 1.11.1.7 (BRENDA, IUBMB)
• Specific activity: 150-250 units/mg solid (using pyrogallol)
• Biological source: horseradish

Eigenschaften

• biological source: horseradish
• Quality Segment: 300
• type: Type II
• form: essentially salt-free, lyophilized powder
• specific activity: 150-250 units/mg solid (using pyrogallol)
• mol wt: ~44 kDa
• solubility: 0.1 M phosphate buffer: soluble (pH 6.0), H₂O: soluble
• absorbance ratio: RZ ≥1.8
• application(s): diagnostic assay manufacturing
• storage temp.: 2-8°C
• SMILES string: [O+H2]O[O-]
• InChI: 1S/H2O3/c1-3-2/h1-2H
• InChI key: JSPLKZUTYZBBKA-UHFFFAOYSA-N

Beschreibung

General description

Horseradish peroxidase (HRP) wird aus Meerrettich (Amoracia rusticana) Wurzeln isoliert und ist innerhalb der Peroxidasen der Gruppe der Ferroprotoporpyhrine zuzuordnen. HRP besteht aus einer einzelnen Polypeptidkette und entält vier Disulfidbrücken. Sie ist ein Glykoprotein mit einem Kohlenhydratanteil von 18%. Der Kohlenhydratanteil besteht aus Galactose, Arabinose, Xylose, Fucose, Mannose, Mannosamin und Galactosamin - in Mengenverhältnissen abhängig vom Isoenzym. Ihr Molekulargewicht (~44 kDa) setzt sich aus der Polypeptidkette (33,890 Daltons), dem Hemin plus Ca²⁺ (~700 Daltons) und der Glykosylierung (~9,400 Daltons) zusammen. Es existieren zumindest sieben Isoenzyme von HRP. Der isoelektrische Punkt von HRP ist in einem Bereich von pH 3 3.0 - 9.0.

Application

Das Enzym wurde als Vergleich während des Peroxidaseassays von Extrakt aus reifen Wiesenschwingel-Blattspreiten verwendet.[1] Es wird auch zum Messen der H₂O₂-Produktion verwendet.[2]

Meerrettichperoxidase (HRP) wird aus Meerrettichwurzeln (Amoracia rusticana) isoliert. Sie wird in biochemischen Anwendungen wie Western Blots, ELISA und Immunhistochemie eingesetzt. Meerrettichperoxidase wird zur Amplifikation eines schwachen Signals und zur Steigerung der Nachweisbarkeit eines Zielmoleküls, z. B. eines Proteins, verwendet. Meerrettichperoxidase, Produkt P8250, wurde zur Untersuchung von nicht-oralen Antigenen bei entzündeter Gingiva[3] und der Ebolavirusglykoproteintoxizität[4] verwendet.

Biochem/physiol Actions

Wenn Meerrettichperoxidase mit einem Substrat inkubiert wird, erzeugt sie ein farbiges, fluorimetrisches oder lumineszierendes Derivat des markierten Moleküls, wodurch die Quantifizierung ermöglicht wird. Meerrettichperoxidase verringert das Maß der Hemmung in einem mutierten cydAB leicht.

HRP kann leicht mit Wasserstoffperoxid (H₂O₂) kombiniert werden, und der resultierende [HRP-H₂O₂]-Komplex kann ein breites Spektrum an Wasserstoffdonatoren oxidieren. Der optimale pH-Wert beträgt 6,0–6,5 und das Enzym ist bei einem pH-Wert im Bereich von 5,0–9,0 am stabilsten. HRP kann durch verschiedene Verfahren an Antikörper konjugiert werden, einschließlich durch Glutaraldehyd, Periodatoxidation, Disulfidbindungen und Amino- oder Thiol-gerichtete Vernetzungsmittel. Sie ist kleiner und stabiler als die Enzymmarkierungen β-Galactosidase und alkalische Phosphatase. Daher ist sie die begehrteste Markierung. Ihre Glykosylierung führt auch zu einer geringeren nichtspezifischen Bindung. Sie wird auch zum Nachweis von Glucose und Peroxiden in Lösung verwendet. Natriumazid, Cyanid, L-Cystein, Dichromat, Ethylenthioharnstoff, Hydroxylamin, Sulfid, Vanadat, p-Aminobenzoesäure sowie die Ionen Cd²⁺, Co²⁺, Cu²⁺, Fe³⁺, Mn²⁺, Ni²⁺ und Pb²⁺ hemmen die Enzymaktivität.

Analysis Note

Die RZ (Reinheitszahl) ist das Absorptionsratio A₄₀₃/A₂₇₅ bestimmt bei 0.5-1.0 mg/ml in deionisiertem Wasser. Es ist ein Mass für den Hämingehalt, nicht für die Enzymaktivität. Selbst Zubereitungen mit hoher RZ können eine tiefe Enzymaktivität haben.

Vorausgehende Arbeiten zeigen, dass es mindestens fünf Isoenzyme enthält.

Other Notes

Eine Pyrogalloleinheit bildet in 20 s bei einem pH-Wert von 6,0 und 20 °C 1 mg Purpurogallin aus Pyrogallol.

Weitere Informationen über Peroxidase finden Sie unter www.sigma-aldrich.com/enzymeexplorer.

Sicherheitshinweise

• pictograms: GHS08
• signalword: Danger
• hcodes: H334
• pcodes: P261 - P284 - P501
• Hazard Classifications: Resp. Sens. 1
• Lagerklasse: 13 - Non Combustible Solids
• ppe: Eyeshields, Gloves, type N95 (US)