17-441

Rac1/Cdc42-Aktivierungsassay-Kit

The Rac1/Cdc42 Activation Assay provides an effective method for detecting Rac & Cdc42 activity in cell lysates.

• Synonym(e): Rac1-Aktivierungsassay
• UNSPSC Code: 12161503
• NACRES: NA.84
• eCl@ss: 32161000

Eigenschaften

• Quality Level: 100
• species reactivity: human, mouse, rat
• manufacturer/tradename: Upstate^®
• technique(s): activity assay: suitable, affinity binding assay: suitable (G-protein)
• NCBI accession no.: NM_006908.3, NM_018890.2, NM_198829.1
• UniProt accession no.: P63000
• shipped in: wet ice
• Gene Information: human ... RAC1(5879)

Beschreibung

General description

Der Rac1/Cdc42-Aktivierungsassay (Katalognr. 17-441) stellt ein wirksames Verfahren für den Nachweis der Rac- und Cdc42-Aktivität in Zelllysaten dar. Dieser Assay nutzt den Downstream-Effektor von Rac/Cdc42, p21-aktivierte Proteinkinase (PAK1), um die aktive GTP-gebundene Form von Rac/Cdc42 aus der Probe zu isolieren. Die p21-Bindungsdomäne (PBD) von PAK1 wird als GST-Fusionsprotein exprimiert und ist an Agarose-Beads gekoppelt. Nach der Präzipitation wird ein Immunblot durchgeführt und das aktivierte Rac/Cdc42 wird mit spezifischen monoklonalen Antikörpern, gefolgt von einem an HRP konjugierten Sekundärantikörper und ECL-Reagens nachgewiesen.

Biochem/physiol Actions

Artenübergreifende Kreuzreaktivität: Mensch und Maus. Eine Kreuzreaktion mit allen Säugetierspezies wird erwartet.
Anti-Rac1, Klon 23A8: Artenübergreifende Kreuzreaktivität: Mensch, Maus und Ratte. Kreuzreaktivität mit anderen Spezies ist nicht bekannt.
Anti-Cdc42Artenübergreifende Kreuzreaktivität: Mensch, Maus, Ratte und Hund. Eine Kreuzreaktivität mit anderen Spezies ist nicht bekannt.

Preparation Note

Bei -20 °C ab Versanddatum 1 Jahr haltbar

Analysis Note

Regelmäßig mittels Präzipitation von Rac1-GTP und Cdc42-GTP aus 3T3/A31- und HeLa-Zelllysaten, die mit GTPγS beladen wurden (Lysate wurden für Cdc42-GTP in vitro mit GTPγS beladen), beurteilt. Das ausgefällte Rac1-GTP und Cdc42-GTP wurde mittels Immunblot-Analyse unter Verwendung von Anti-Rac1 (1 μg/ml) nachgewiesen.

Other Notes

Rac/Cdc42-Assay-Reagens (PAK-1-PBD-Agarose), Katalognr. 14-325: Ein Fläschchen mit 300 μg an 150 μl Glutathion-Agarose-Beads gebundenes PAK-1 PBD, das als 50%ige Aufschlämmung in 20 mmol/l PBS, pH-Wert 7,4, mit 50 % Glycerin für ein Endvolumen von 300 μl bereitgestellt wird.

Anti-Rac1, Klon 23A8, Katalognr. 05-389: Ein Fläschchen mit 250 μg mit Protein G aufgereinigtem Maus-IgG_2b in 250 μl Lagerpuffer (0,1 mol/l Tris-Glycin, pH-Wert 7,4, 0,15 mol/l NaCl mit 0,05 % Natriumazid)

Anti-Cdc42 (monoklonales Maus-IgG₁), Katalognr. 05-542: Ein Fläschchen mit 50 μg aufgereinigtem Maus-IgG₁ in 200 μl 50 % Lagerpuffer (20 mmol/l Natriumphosphat, pH-Wert 7,5, 150 mmol/l NaCl, 1,5 mmol/l Natriumazid mit 1 mg/ml BSA) und 50 % Glycerin.

Mg2+-Lyse-/Waschpuffer, 5X, Katalognr. 20-168: Zwei Fläschchen mit je 18 ml 5X-MLB: 125 mmol/l HEPES, pH-Wert 7,5, 750 mmol/l NaCl, 5 % Igepal Ca-630, 50 mmol/l MgCl₂, 5 mmol/l EDTA und 10 % Glycerin.

100X GTPγS, 10 mmol/l, Katalognr. 20-176: Ein Fläschchen mit 50 μl 10-mmol/l-GTPγS, 100X-Stammlösung in 50 mmol/l Tris-HCl, pH-Wert 7,8, nicht hydrolysierbares Analogon von GTP. Ausreichend zum Markieren von 5 ml Zelllysaten.

100X GDP, 100 mmol/l, Katalognr. 20-177: Ein Fläschchen mit 50 μl 100-mmol/l-GDP, 100X-Stammlösung in 50 mmol/l Tris-HCl, pH-Wert 7,8. GDP (Guanosin-5′-Diphosphat) für die In-vitro-Markierung von G-Proteinen in der inaktiven Form. Ausreichend zum Markieren von 5 ml Zelllysaten.

Legal Information

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Sicherheitshinweise

• pictograms: GHS05,GHS09
• signalword: Danger
• Lagerklasse: 10 - Combustible liquids
• hcodes: H318,H410,EUH430
• pcodes: P201 - P202 - P273 - P280 - P305 + P351 + P338 - P391 - P405 - P501
• Hazard Classifications: Aquatic Acute 1 - Aquatic Chronic 2 - ED ENV 1 - Eye Dam. 1
• wgk: WGK 3