MAB369

Anti-Dopamin-Transporter-Antikörper, NT, Klon DAT-Nt

culture supernatant, clone DAT-Nt, Chemicon^®

• Synonym(e): DAT
• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.41
• eCl@ss: 32160702
• Conjugate: unconjugated
• Clone: DAT-Nt, monoclonal
• Application: ICC, IHC, WB
• Citations: 317

Eigenschaften

• biological source: rat
• Quality Segment: 100
• conjugate: unconjugated
• antibody form: culture supernatant
• antibody product type: primary antibodies
• clone: DAT-Nt, monoclonal
• species reactivity: rat, human, mouse, monkey
• manufacturer/tradename: Chemicon^®
• technique(s): immunocytochemistry: suitable, immunohistochemistry: suitable, western blot: suitable
• isotype: IgG2aκ
• NCBI accession no.: NM_001044.3
• UniProt accession no.: Q01959
• shipped in: dry ice
• target post-translational modification: unmodified
• Gene Information: human ... SLC6A3(6531)

Beschreibung

General description

Der Transmembran-Dopamintransporter (DAT) befindet sich am präsynaptischen Nervenende und ist für die Beendigung der dopaminergen Transmission verantwortlich, indem Dopamin von der Synapsenspalte in das dopaminerge Neuron (Wiederaufnahme) transportiert wird. Dopaminerge Bahnen stehen in engem Zusammenhang mit Belohnung und Sucht, Motivation, Alkoholismus, ADHS und degenerativen motorischen Erkrankungen wie Parkinson und Chorea Huntington.

~ 70–85 kDa

Immunogen

Epitop: N-Terminus

N-Terminus des humanen Dopamintransporters fusioniert mit Glutathion-S-Transferase.

Application

Dieser Anti-Dopamin-Transporter-Antikörper, N-Terminus, Klon DAT-Nt ist zur Verwendung bei IC, IH, WB für die Detektion des Dopamintransporters validiert.

Forschungskategorie
Neurowissenschaft

Forschungsunterkategorie
Ionenkanäle & Transporter

Western Blot: Erkennt bei ca. 70–85 kDa eine diffuse Bande auf Western Blots von Extrakten (20 μg Gesamtprotein) aus dem humanen Nucleus caudatus, Putamen und Nucleus accumbens.

Immunhistochemie: In 4 % Paraformaldehyd fixiertes Gewebe (vorsichtig vorgehen, um eine Überfixierung des Gewebes zu vermeiden); Perfusion maximal 90 Minuten nach der Fixierung, mit anschließender Kryoprotektion. Empfohlene Arbeitsverdünnung: 1:1.000 - 1:10.000. Bei Verwendung mit Rattengewebe werden absorbierte Anti-Ratte Sekundärantikörper sowie die Verwendung von Ratten-PAP-Systemen empfohlen, da der ABC-Nachweis die Sensitivität anderenfalls erhöht.

Immunzytochemie: 1:5.000 bis 1:10.000.

Immunblotting (bei Ratten nicht empfohlen)

Optimale Arbeitsverdünnungen und -protokolle müssen vom Anwender bestimmt werden.



IMMUNOHISTOCHEMIE-PROTOKOLL FÜR MAB369

Dieser Antikörper wurde erfolgreich bei 30 μm, freischwebenden, in 4 % Paraformaldehyd fixierten Gehirngewebeschnitten von Mäusen verwendet. Alle Schritte werden unter konstantem Rühren durchgeführt. Im Folgenden ist das empfohlene Protokoll aufgeführt.

1) 3 Waschvorgänge von 10 Minuten in TBS (mit oder ohne 0,25 % Triton).

2) 30 Minuten in TBS mit 3 % Serum (vom gleichen Wirt wie der Sekundärantikörper) inkubieren.

3) Den ordnungsgemäß in TBS mit 1 % Serum (vom gleichen Wirt wie der Sekundärantikörper) verdünnten Primärantikörper (mit oder ohne 0,25 % Triton) 2 Stunden bei Raumtemperatur und anschließend 16 Stunden bei 4 °C inkubieren.

4) 3 Waschvorgänge von 10 Minuten in TBS.

5) Mit dem ordnungsgemäß in TBS mit 1 % Serum (vom gleichen Wirt wie der Sekundärantikörper) verdünntem Sekundärantikörper inkubieren.

6) 3 Waschvorgänge von 10 Minuten in TBS.

7) ABC Elite (1:200 Vector Labs) in TBS.

8) 2 Waschvorgänge von 10 Minuten in TBS.

9) 1 Waschvorgang von 10 Minuten in Phosphatpuffer (keine Kochsalzlösung)

10) DAB-Reaktion mit zur Intensivierung zugegebenem 0,06 % NiCl.

11) 2 Waschvorgänge von 10 Minuten in PBS.

12) 1 Waschvorgang von 10 Minuten in Phosphatpuffer (keine Kochsalzlösung)

Biochem/physiol Actions

Erkennt den N-Terminus des Dopamintransporters. Zeigt keine Kreuzreaktivität mit dem eng verwandten Serotonin- und Norepinephrin-Transporter (Miller, 1997). Die Immunlokalisation von DAT auf Paraformaldehyd-fixierten gefrorenen Menschenhirn-Gewebeschnitten unter Verwendung von MAB369 zeigt eine dichte punktierte Färbung über die gesamte Fläche von Nucleus caudatus, Putamen und Nucleus accumbens (Miller, 1997).

Physical form

Nicht aufgereinigt

Nicht aufgereinigter Gewebekulturüberstand, der vor der Abfüllung in Fläschchen durch eine 0,2-μm-Membran gefiltert wird. Das Produkt enthält 20 %FBS und Ciprofloxacin in einer Endkonzentration von 10 μg/ml.

Preparation Note

Bei -20 °C 1 Jahr ab Versanddatum haltbar. Aliquotieren, um wiederholtes Einfrieren und Auftauen zu vermeiden. Für maximale Produktrückgewinnung das Originalfläschchen nach dem Auftauen und vor dem Abnehmen der Kappe zentrifugieren.

Analysis Note

Kontrolle
Positivkontrolle: Gehirngewebe (Nucleus caudatus, Putamen und Nucleus accumbens)

Other Notes

Gewinner des CiteAb Award 2024 in der Kategorie „Supplier Succeeding in Parkinson′s Research“ (Erfolgreiche Anbieter in der Parkinson-Forschung)

Legal Information

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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