GF146

Wnt-5a-Protein, rekombinant, Maus

The Wnt5a protein is a 352 amino acid protein containing 23 conserved cysteines & contains a cysteine modified by palmitate which is essential for receptor binding & biological activity.

• UNSPSC Code: 12352202
• NACRES: NA.77
• eCl@ss: 32160405

Eigenschaften

• Quality Level: 100
• manufacturer/tradename: Chemicon^®
• concentration: 80-100 ng/μL
• technique(s): cell culture | mammalian: suitable
• impurities: <0.1 ng/μg Endotoxin (of Wnt5a)
• input: sample type neural stem cell(s); sample type mesenchymal stem cell(s)
• UniProt accession no.: P22725, P41221
• shipped in: dry ice
• storage temp.: -10 to -25°C

Beschreibung

General description

Produktherkunft: Wnt5a wurde mittels Blue Sepharose, Gelfiltration und Affinitätschromatographie mit Heparin aus einem konditionierten Medium aufgereinigt.

Wnt5a, ein Mitglied der stark konservierten Wnt-Proteinfamilie, ist ein Protein mit 352 Aminosäuren, das 23 konservierte Cysteine und ein durch Palmitat modifiziertes Cystein enthält, das für die Rezeptorbindung und biologische Aktivität von entscheidender Bedeutung ist. Die Aminosäurensequenz von Wnt5a enthält zudem ein N-terminales Signalpeptid, was bedeutet, dass das Protein bei Expression in die Zellkultur in das Medium sezerniert wird.

Wnt-Liganden binden an Zelloberflächen-Co-Rezeptoren, die aus einem Frizzled-Protein und einem Lipoproteinrezeptor-verwandten Protein bestehen (5/6). Wnt5a gehört zur nicht kanonischen Klasse von Wnt-Proteinen, die nicht von den β-Catenin-Signalwegen abhängig sind bzw. diese hemmen. Bei Bindung an seinen Rezeptor löst Wnt5a eine intrazelluläre Ca-Freisetzung aus, wodurch PKC und CaMK11 aktiviert werden, die wiederum die MAPkinase-Kinase TAK1 und die Nemo-like-Kinase (NLK) aktivieren. NLK phosphoryliert den Proteinkomplex Lef1/TCF, wodurch die Bildung des DNA-Komplexes β-Catenin-Lef1/TCF gehemmt wird. Im Gegensatz dazu stabilisiert die Wnt3a-Signalisierung β-Catenin, wodurch die Bildung des DNA-Komplexes β-Catenin-Lef1/TCF verstärkt wird.

Die Wnt-Signalisierung wurde mit der Regulierung der Differenzierung von Stammzellen in Zusammenhang gebracht. Darüber hinaus spielen Wnts nachweislich eine putative Rolle bei der Regulierung von adulten Stammzellen. Kürzlich wurde nachgewiesen, dass mit einer Injektion von embryonalen Stammzellen ins Herz Herzfehler korrigiert werden können. Dies erfolgt durch die Sekretion von Faktoren aus Stammzellen, die Gendefekte in Nachbarzellen korrigieren. Wnt5a, ein kurzzeitig von den Stammzellen sezernierter Faktor, ist nachweislich für diesen Prozess von entscheidender Bedeutung (Fraidenraich und Benzra, 2006).

Application

• Dieses Protein ist äußerst stark haftend und wird ohne Chaps-Detergens an Kunststoffware anhaften.
• Dieses Protein sollte bei Verwendung, wenn möglich, ohne Vorfilterung direkt in der benötigten Verdünnung auf die Zellen dosiert werden.
• Die Toxizität des Chaps im Speicherpuffer sollte vor Verwendung des Wnt5a-Proteins empirisch an der Zelllinie getestet werden.
• Wir empfehlen in der Regel eine Wnt5a-Mindestverdünnung von 1:1000 für Säugetierzellen, wodurch eine Chaps-Endkonzentration entsteht, die für die Zellen nicht toxisch ist.
• Bei einer Dosierung auf den Zellen über mehrere Tage/Wochen wird empfohlen, täglich neues Wnt5a-haltiges Medium aufzufüllen, anstatt täglich erneut Wnt5a in das bestehende Medium zu dosieren, da sich eine Chaps-Ansammlung negativ auf die Zellviabilität auswirkt.

Für jede Anwendung sollten optimale Konzentrationen bestimmt werden.

Packaging

8–10 μg/Fläschchen

Physical form

Gefrorene Flüssigkeit in PBS mit 1,0 % Chaps.

Preparation Note

Das gefrorene Material kann bei -20 °C bis zum auf dem Etikett angegebenen Verfallsdatum aufbewahrt werden. Nach Erhalt auftauen, in für den Einmalgebrauch bestimmte Aliquote aufteilen und bei -20 °C aufbewahren. Ein für den Einmalgebrauch bestimmtes Aliquot darf nach dem Auftauen NICHT wieder eingefroren werden. Aufgetautes Material kann bei 4 °C bis zu einen Monat aufbewahrt werden.

Analysis Note

Spezifische Aktivität: Die biologische Aktivität von Wnt5a wurde anhand seiner Fähigkeit nachgewiesen, die Induktion der alkalischen Phosphatasensynthese mittels Wnt3a in Gegenwart von BMP4 durch die osteoblastischen Zellen C2C12 zu antagonisieren. Der EC50 für diese Wirkung liegt in der Regel bei 100 ng/ml.

Legal Information

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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• Lagerklasse: 13 - Non Combustible Solids
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