ESG112

ESGRO^®-2i Supplement Kit (1.000x)

enhances viability of mouse embryonic stem and iPS cells in the absence of serum & feeder cells

• Synonym(e): 2i Naive ES/IPS Supplement
• UNSPSC Code: 12352207
• NACRES: NA.81
• eCl@ss: 32161000

Eigenschaften

• Quality Segment: 100
• assay: >95% (active component mLIF, SDS-PAGE)
• form: liquid
• manufacturer/tradename: Chemicon^®, ESGRO^®
• technique(s): cell culture | stem cell: suitable
• impurities: <0.1 ng/μg Endotoxin (of LIF)
• input: sample type: mouse embryonic stem cell(s); sample type induced pluripotent stem cell(s)
• NCBI accession no.: NM_008501
• UniProt accession no.: P09056
• Gene Information: human ... LIF(3976)

Beschreibung

General description

Bisher konnten zwei Stadien der Pluripotenz bei Mäusen in In-vitro-Kultur stabilisiert werden. ‘Naiv’ ist das früheste Stadium, das zu einer reineren Population angereichert werden kann, welches als ‘Grundzustand’ bezeichnet wird. Das naive Stadium ähnelt am meisten einem embryonalen Epiblasten in der Blastozyste vor der Implantation. Das vorbereitete Stadium ist dem Epiblasten direkt nach der Implantation am ähnlichsten. Zwischen diesen Stadien bestehen deutliche Unterschiede in Bezug auf Kultur, Expression, Epigenetik (einschließlich der entsprechenden X-Inaktivierung) und Entwicklungskompetenz. Die Tatsache, dass sich aus naiven mESC durch tetraploide Komplementierung vollständige Tiere entwickeln können, aus vorbereiteten mESC aber nicht, ist ein besonders überzeugender Grund für hohe Erwartungen in Bezug auf naive hESC.
Maus-Leukämie-Hemmfaktor (LIF) ist eine kritische Komponente in Maus-ES-Zellkulturmedien, in denen er die Selbsterneuerung fördert und die Pluripotenz der embryonalen Stammzellen (ES) der Maus aufrechterhält. Neue Studienergebnisse zeigen, dass Maus-ES-Zellen durch Inhibitoren, die den MAPK/Erk-Wg blockieren, in Kombination mit dem Inhibitor der Glycogensynthasekinase 3 (GSK3) vor differenzierungsauslösenden Signalen geschützt werden und dadurch Selbsterneuerung auch ohne LIF möglich ist. Unter diesen Bedingungen kultivierte Maus-ES-Zellen behalten ihre Fähigkeit zur Reaktion auf LIF. In Studien wurde gezeigt, dass die Zugabe von LIF zu den Kulturbedingungen mit 2i zu einem besseren Koloniewachstum und einem gesünderen Allgemeinzustand der ES-Kolonien führt. Unterstützt einen pluripotenten naiven Zustand/Grundzustand.

Application

Das ESGRO^®-2i Supplement Kit (1.000x) enthält den selektiven GSK3β-Inhibitor LIF und Mek-1/2-Inhibitoren zur Verbesserung der Lebensfähigkeit von embryonalen Stammzellen der Maus und von iPS-Zellen ohne Serum und Fütterzellen. Unterstützt einen pluripotenten naiven Zustand/Grundzustand.

Protokoll für die Zubereitung des Mediums (Empfehlung):
1. MEK/GSK3-Inhibitorzusatz und mLIF bei Raumtemperatur auftauen.
2. Jedes Fläschchen mit Zusatz reicht zur Herstellung von 500 ml Vollmedium für serumfreie oder serumabhängige Maus-ES-Kultur aus.
3. Übertragen Sie den Inhalt der Fläschchen mit den Ergänzungen in 1000-facher Verdünnung aseptisch in die vorgewärmte Flasche mit serumfreiem Basalmedium wie ESGRO Complete Basalmedium (Katalognr. SF002-500) oder serumhaltigem Medium und mischen Sie es.
4. Das Komplettmedium kann durch einen 0,22 µm-Filter (Katalognr. S2GVU05RE) filtriert werden.
5. Nach Zugabe der Zusätze kann das Medium im Dunkeln bei 4 °C bis zu 10 Tage lang gelagert werden.

Packaging

Wird in gebrauchsfertigen Aliquots geliefert, ausreichend für die Supplementierung von 10 x 500-ml-Maus-ES-Zellkulturmedium für insgesamt 5 Liter Vollmedium.

Physical form

Beide Zusätze sind in 1.000-facher Konzentration in Lösung formuliert. LIF der Maus wird in phosphatgepufferter Kochsalzlösung mit 1 % w/v Rinderserumalbumin (BSA) als Träger zur Stabilisierung zubereitet. MEK/GSK3-Inhibitorzusatz wird in DMSO zubereitet.

Preparation Note

Bei -20 °C aufbewahren. ESGRO Supplement sollte nach dem Auftauen bei 2 bis 8 °C gelagert werden. ESGRO Supplement (Artikel-Nr. CS210511) nicht einfrieren. Das Verfallsdatum entnehmen Sie bitte dem Etikett.

ESGRO Supplement wird sterilfiltriert (0,22-μm-Filter) geliefert und ist negativ in Mykoplasmentests.

Analysis Note

Spezifische Aktivität: ESGRO Supplement wird sowohl an murinen ES-Zellen als auch an murinen myeloischen Leukämiezellen M1 beurteilt. Ein Standard von 50 Einheiten gilt als die Konzentration an ESGRO Supplement in 1,0 ml Gewebekulturmedium, die eine Differenzierung von 50 % der M1-Kolonien (Metcalf, 1988) induziert.

Embryonaler Stammzellassay: Hemmung der Differenzierung bei 1.000 Einheiten/ml
muriner myeloischer Leukämiezellen, M1-Assay: Spezifische Aktivität ist größer oder gleich 10⁸ Einheiten/mg

Other Notes

ESGRO^® Supplement: (Artikel-Nr. CS210511): Rekombinanter Maus-Leukämie-Hemmfaktor (LIF), 0,5 x 106 U/ml. Zehn (10) 0,5-ml-Fläschchen.

MEK/GS3 Inhibitor Supplement: (Best.- Nr. CS210510-500UL): Zehn (10) 0,5-ml-Fläschchen.

Legal Information

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

ESGRO is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

Sofern in unserem Katalog oder anderen Begleitdokumenten unserer Produkte nicht anders angegeben, sind unsere Produkte nur für Forschungszwecke vorgesehen und nicht für andere Zwecke zu verwenden, einschließlich, jedoch nicht beschränkt auf unautorisierte kommerzielle Verwendung, zur In-vitro-Diagnostik, für Ex-vivo- oder In-vivo-Therapiezwecke oder jegliche Art der Einnahme oder Anwendung bei Menschen oder Tieren.

LABEL-LIZENZ – VERWENDUNG NUR ZU FORSCHUNGSZWECKEN

Leukämiehemmender Faktor („LIF“) ist durch die US-Patente Nr. 5.443.825 und 5.750.654 sowie die kanadischen Patente Nr. 1.341.581 und 1.341.469, die AMRAD Corporation Ltd. gehören, geschützt und ist für Millipore ausschließlich zu Forschungszwecken lizensiert. Die Verwendung dieses Produkts ist auf Forschungszwecke beschränkt und nicht für kommerzielle Zwecke vorgesehen, einschließlich der Herstellung oder Entwicklung anderer Forschungsprodukte aus diesem Produkt oder der Verwendung dieses Produkts als eine Komponente in einem Forschungskit. Dieses Produkt darf nicht zu Diagnosezwecken bei Menschen eingesetzt werden.

Der Käufer kann die Annahme der Bedingungen dieser Label-Lizenz verweigern, indem er dieses Produkt ungeöffnet zurücksendet und eine vollständige Rückerstattung des bezahlten Kaufpreises erhält.

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Sicherheitshinweise

• Lagerklasse: 10 - Combustible liquids
• wgk: WGK 2