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Diphtheria Toxin, Unnicked

from Corynebacterium diphtheriae, Major band under reduced conditions (SDS-PAGE), <15% nicking, solid, protein synthesis inhibitor, Calbiochem^®

• Synonym(e): DTx
• UNSPSC Code: 12352200
• NACRES: NA.77
• Form: solid
• Quality level: 100
• Storage condition: OK to freeze

Eigenschaften

• Produktname: Diphtherietoxin, Unnicked, Corynebacterium diphtheriae, Diphtheria toxin catalyzes ADP-ribosylation of eukaryotic aminoacyltransferase II (EF2) using NAD as substrate. Activation requires nicking with a protease followed by reduction with DTT.
• Quality Level: 100
• description: RTECS - XW5807200
• form: solid
• manufacturer/tradename: Calbiochem^®
• storage condition: OK to freeze
• solubility: soluble (Aqueous buffers or H2O. Please see vial label for lot-specific reconstitution volume.)
• shipped in: ambient
• storage temp.: 2-8°C

Beschreibung

General description

Diphtherietoxin, Unnicked, aus Corynebacterium diphtheriae katalysiert die ADP-Ribosylierung der eukaryotischen Aminoacyltransferase II (EF2) mit NAD als Substrat und hemmt dadurch die Proteinsynthese. Kann auch den internukleosomalen Abbau induzieren. Verursacht DNA-Fragmentierung und Zytolyse in U937-Zellen. Für die Aktivierung ist Nicking mit einer Protease und die anschließende Reduktion mit DTT erforderlich. Das als Proenzym synthetisierte und ausgeschiedene Diphtherietoxin besteht aus einer einzigen Polypeptidkette mit 63 kDa. Damit seine enzymatische Aktivität ausgeprägt wird, müssen in dem Toxin zwei kovalente Strukturänderungen erfolgen. Zunächst entsteht durch eine schwache Proteolyse ein enzymatisch inaktives sogenanntes „nicked toxin“, das aus zwei über eine Disulfidbindung verbundenen Hauptfragmenten (A und B) besteht. Das „nicked toxin“ wird durch Thiole (DTT) reduziert und dadurch das enzymatisch aktive N-terminale A-Fragment (24 kDa) freigesetzt. Das C-terminale B-Fragment (39 kDa) weist keine offensichtliche enzymatische Aktivität auf. Das B-Fragment wird für die Toxizität benötigt und ist für die Erkennung und die Bindung des Toxins an Rezeptoren auf der Zelloberfläche verantwortlich.

Application

Diphtherietoxin, Unnicked, Corynebacterium diphtheriae, wurde für die intraperitoneale Verabreichung an Mäuse zur Zellablation eingesetzt.[1]

Biochem/physiol Actions

Das Produkt konkurriert nicht mit ATP.

Hinweis: Die Toxizität kann chargenabhängig variieren. Jedes Labor sollte die optimale Dosierung für jede einzelne Anwendung ermitteln.

Primärziel
Eukaryotische Aminoacyltransferase II (EF2)

Reversibel: nein

Zellpermeabel: nein

Physical form

Lyophilisiert aus sterilem 10 mM Tris, 1 mM EDTA, pH 7,5.

Preparation Note

Das chargenspezifische Rekonstituierungsvolumen entnehmen Sie bitte dem Fläschchenetikett.

Nach der Rekonstituierung in Aliquote aufteilen, rasch auf Trockeneis einfrieren und anschließend bei -70 °C einfrieren. Die Aliquote sollten ausschließlich bei Raumtemperatur wieder aufgetaut werden. Für Tests, in denen eine sehr geringe Konzentration des Diphtherietoxins zum Einsatz kommt, wird ein Trägerprotein wie BSA oder HSA empfohlen.

Analysis Note

Hauptbande (unter reduzierenden Bedingungen) mit ~ 63 kDa

Other Notes

Das Diphtherietoxin wird aus dem Corynebacterium-diphtheriae-Stamm Park Williams 8 durch ein modifiziertes Verfahren nach Pappenheimer et al. isoliert und aufgereinigt. Disk-Elektrophorese bei alkalischem pH-Wert unter nicht denaturierenden Bedingungen ergab, dass dieses Produkt als eine Hauptbande von 63 kDa wandert; dies entspricht dem intakten Toxin. Es können auch zwei schnellere, schwächer gefärbte Banden (24 und 39 kDa) auftreten, die den A- und B-Fragmenten entsprechen. Nach der Trypsinbehandlung in DTT zeigt das Diphtherietoxin in Tests auf seine Fähigkeit zur ADP-Ribosylierung der EF2 eine hohe Aktivität. Die ermittelte ED50 für CHO-Zellen beträgt ca. 0,4 ng/ml.

Das Diphtherietoxin wird aus dem Corynebacterium-diphtheriae-Stamm Park Williams 8 durch ein modifiziertes Verfahren nach Pappenheimer et al. isoliert und aufgereinigt. Disk-Elektrophorese bei alkalischem pH-Wert unter nicht denaturierenden Bedingungen ergab, dass dieses Produkt als eine Hauptbande von 63 kDa wandert; dies entspricht dem intakten Toxin. Es können auch zwei schnellere, schwächer gefärbte Banden (24 und 39 kDa) auftreten, die den A- und B-Fragmenten entsprechen. Nach der Trypsinbehandlung in DTT zeigt das Diphtherietoxin in Tests auf seine Fähigkeit zur ADP-Ribosylierung der EF2 eine hohe Aktivität. Die ermittelte ED50 für CHO-Zellen beträgt ca. 0,4 ng/ml.

Legal Information

CALBIOCHEM is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

Toxizität: Gesundheitsschädlich (C)

Sicherheitshinweise

• pictograms: GHS06
• signalword: Danger
• hcodes: H300 + H330
• pcodes: P260 - P264 - P271 - P284 - P304 + P340 + P310 - P403 + P233
• Hazard Classifications: Acute Tox. 1 Inhalation - Acute Tox. 1 Oral
• Lagerklasse: 6.1A - Combustible acute toxic Cat. 1 and 2 / very toxic hazardous materials
• flash_point_f: Not applicable
• flash_point_c: Not applicable