P6556

Proteinase K aus Tritirachium album

lyophilized powder, ≥30 units/mg protein

• Synonym(e): Endopeptidase K
• CAS-Nummer: 39450-01-6
• UNSPSC Code: 12352204
• eCl@ss: 32160410
• EC Number: 254-457-8
• NACRES: NA.54
• MDL number: MFCD00132129
• EG-Nummer: 3.4.21.64 (BRENDA, IUBMB)
• Specific activity: ≥30 units/mg protein

Eigenschaften

• form: lyophilized powder
• Quality Segment: 300
• specific activity: ≥30 units/mg protein
• mol wt: 28.93 kDa
• technique(s): DNA extraction: suitable
• solubility: H₂O: soluble 1 mg/mL, clear, colorless
• foreign activity: Dnase ≤30 Kunitz units/mg solid, RNase ≤0.003 Kunitz units/mg solid
• shipped in: wet ice
• storage temp.: −20°C

Beschreibung

Application

Proteolytische Deaktivierung von Nucleasen während der Isolation von DNA und RNA

Nützlich zur proteolytischen Inaktivierung von Nukleasen bei der Isolierung von DNA und RNA.
Entfernt Endotoxine, die an kationische Proteine wie Lysozym und Ribonuklease A binden.
Berichten zufolge nützlich für die Isolierung von Leber-, Hefe- und Mungbohnen-Mitochondrien
Bestimmung der Enzymlokalisierung auf Membranen
Behandlung von Paraffinschnitten zur Freilegung von Antigenbindungsstellen zur Antikörpermarkierung.
Verdauung von Proteinen aus Hirngewebeproben für Prionen in der TSE-Forschung.

Produkt P6556 wird als lyophilisiertes Pulver geliefert. Produkt P6556 wurde zum Abbau des Proteins der menschlichen Linse eingesetzt[1]. Protease-Footprinting durch Verdau mit Proteinase K kann Protein-Protein-Oberflächenwechselwirkungen zeigen.[2] Das Enzym von Sigma wurde für den Prähybridisierungsschritt bei Hühnerembryonen verwendet.[3] Es wurde auch zur Anreicherung von PrP^Sc, einem Prionprotein aus Schaf-, Hamster- und Maus-Scrapie-Proben (Traberkrankheit), verwendet.[4]

Proteinase K ist zur proteolytischen Inaktivierung von Nukleasen bei der Isolierung von DNA und RNA geeignet.
Sie wird verwendet, um Endotoxine zu entfernen, die an kationische Proteine wie Lysozyme und Ribonuklease A gebunden sind.
Sie ist zur Isolierung von Mitochondrien aus Leber, Hefe und Mungbohnen geeignet
und dient dazu, die Lokalisierung von Enzymen auf Membranen zu ermitteln.
Sie wird zur Behandlung von Paraffinschnitten genutzt, um die Antigenbindungsstellen für die Antikörpermarkierung freizulegen, und
für den Proteinverdau in Gehirngewebeproben für Prionen in der Forschung über TSE (Transmissible Spongiform Encephalopathies) eingesetzt. Produkt P6556 wird als lyophilisiertes Pulver geliefert. Produkt P6556 wurde zum Abbau des Proteins der menschlichen Linse eingesetzt[1].

Biochem/physiol Actions

Proteinase K ist eine stabile und hochreaktive Serinprotease. Ergebnisse von Kristall- und Molekularstrukturstudien lassen darauf schließen, dass das Enzym zur Subtilisin-Familie mit einer katalytischen Triade (Asp³⁹-His⁶⁹-Ser²²⁴) im aktiven Zentrum gehört. Es ist in einer Reihe von Umgebungen stabil: pH, Puffersalze, Detergenzien (SDS) und Temperatur. In Gegenwart von 0,1–0,5 % SDS bleibt Proteinase K aktiv und verdaut zahlreiche Proteine und Nukleasen in DNA-Präparationen, ohne die Integrität der isolierten DNA zu beeinträchtigen.

Proteinase K weist eine weite Spezifität auf und baut selbst im nativen Zustand viele Proteine ab. In erster Linie spaltet sie die Peptidbindung nahe der Carboxylgruppe von aliphatischen und aromatischen Aminosäuren mit blockierten α-Aminogruppen.[4][5] Der optimale pH-Wert liegt zwischen 7,5 und 9,0[4] und der isoelektrische Punkt beträgt 8,9. Ca²⁺ (1–5 mM) ist für ihre Aktivierung erforderlich. Proteinase K wird von Diisopropylfluorphosphat (DIFP) oder Phenylmethylsulfonylfluorid (PMSF) gehemmt.

Other Notes

Eine Einheit hydrolysiert harnstoffdenaturiertes Hämoglobin und erzeugt eine Färbung, die 1,0 μmol Tyrosin pro Minute bei pH 7,5 und 37 °C (Farbe vom Folin-Ciocalteu-Reagens) entspricht.

Sicherheitshinweise

• pictograms: GHS08,GHS07
• signalword: Danger
• hcodes: H315,H319,H334,H335
• pcodes: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Hazard Classifications: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• target_organs: Respiratory system
• Lagerklasse: 11 - Combustible Solids
• flash_point_f: Not applicable
• flash_point_c: Not applicable
• ppe: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves