SCM015

Expansionsmedium für mesenchymale Stammzellen (1X)

The Mesenchymal Stem Cell Expansion Medium (1x) has been optimized & validated for Stem cell culture. This medium is available in a 500mL format.

• Synonym(e): MSC-Wachstumsmedium, Stammzellkulturmedium
• UNSPSC Code: 12352207
• NACRES: NA.75
• eCl@ss: 32160801

Eigenschaften

• Quality Level: 200
• form: liquid
• manufacturer/tradename: Chemicon^®
• technique(s): cell culture | stem cell: suitable
• input: sample type mesenchymal stem cell(s)
• shipped in: dry ice
• storage temp.: -10 to -25°C

Beschreibung

Application

Zellen auftauen:

1. Zellen nicht auftauen, bis das empfohlene Medium und die geeignete Kunststoffware und/oder Glasware griffbereit sind.
2. Fläschchen mit mesenchymalen Stammzellen aus flüssigem Stickstoff nehmen und in einem Wasserbad mit 37 °C inkubieren. Engmaschig überwachen, bis die Zellen vollständig aufgetaut sind. Die maximale Zellviabilität hängt von dem schnellen und vollständigen Auftauen der gefrorenen Zellen ab. WICHTIG: Zellen nicht vortexen.
3. Die Außenseite des Fläschchens mit 70%igem Ethanol desinfizieren, sobald die Zellen vollständig aufgetaut sind. Umgehend mit dem nächsten Schritt fortfahren.
4. In einer Laminar-Flow-Werkbank eine 1- oder 2-ml-Pipette verwenden, um die Zellen in ein steriles 15-ml-Zentrifugenröhrchen zu übertragen. Darauf achten, dass bei dem Transfer keine Bläschen eingebracht werden.
5. Mit einer 10-ml-Pipette langsam tropfenweise 9 ml Expansionsmedium für mesenchymale Stammzellen (bei 37 °C vorgewärmt) in das 15-ml-Zentrifugenröhrchen geben. WICHTIG: Nicht das gesamte Volumen Medium auf einmal zu den Zellen geben. Dies kann zu einer verringerten Zellviabilität aufgrund von osmotischem Schock führen.
6. Zellsuspension vorsichtig durch zweimaliges langsames Auf- und Abpipettieren mischen. Darauf achten, dass keine Bläschen eingebracht werden. WICHTIG: Zellen nicht vortexen.
7. Das Röhrchen bei 300 x g 2–3 Minuten zentrifugieren, um die Zellen zu pelletieren.
8. So viel Überstand wie möglich abgießen. Schritte 4–8 sind erforderlich, um restliches Kryokonservierungsmittel (DMSO) zu entfernen.
9. Zellen in einem Gesamtvolumen von 10 ml Expansionsmedium für mesenchymale Stammzellen (auf 37 °C vorgewärmt) resuspendieren.
10. Zellmischung auf eine 10-cm-Gewebekulturplatte ausplattieren.
11. Zellen bei 37 °C in einem befeuchteten Inkubator mit 5 % CO₂ inkubieren.
12. Am nächsten Tag das Medium gegen frisches Expansionsmedium für mesenchymale Stammzellen (auf 37 °C vorgewärmt) austauschen. Danach alle zwei bis drei Tage gegen frisches Medium austauschen.
13. Wenn die Zellen etwa 80 % konfluent sind, können sie mit Accutase^® dissoziiert und passagiert werden oder alternativ zum späteren Gebrauch eingefroren werden.

Subkultivierung:

1. Medium vorsichtig aus der 10-cm-Kulturplatte mit der konfluenten Schicht mesenchymaler Stammzellen entfernen.
2. 3–5 ml Accutase zugeben und 3 Minuten in einem Inkubator mit 37 °C inkubieren.
3. Die Platte inspizieren und die vollständige Ablösung der Zellen durch sanftes Klopfen gegen die Seite der Platte mit der Handfläche sicherstellen. 4. 5 ml Expansionsmedium für mesenchymale Stammzellen (auf 37 °C vorgewärmt) zugeben.
5. Die dissoziierten Zellen in ein 15-ml-Zentrifugenröhrchen übertragen.
6. Das Röhrchen bei 300 x g 2–3 Minuten zentrifugieren, um die Zellen zu pelletieren.
7. Den Überstand entsorgen
8. 2 ml Expansionsmedium für mesenchymale Stammzellen in das Zentrifugenröhrchen geben und die Zellen gründlich resuspendieren. WICHTIG: Nicht vortexen.
9. Die Anzahl der Zellen mit einem Hämozytometer zählen.
10. Die Zellen in geeigneten Flaschen, Platten oder Wells in Expansionsmedium für mesenchymale Stammzellen auf die gewünschte Dichte ausplattieren. Wir plattieren die Zellen in der Regel zu ~2 Millionen Zellen je 10-cm-Platte oder T75-Flasche.

Physical form

Expansionsmedium für mesenchymale Stammzellen ist eine proprietäre Formulierung, die fetales Kälberserum enthält.

Preparation Note

Expansionsmedium für mesenchymale Stammzellen sollte bis zum Gebrauch bei -20 °C gelagert werden. Nach dem Auftauen kann das Basalmedium bis zu einem Monat bei 2–8 °C aufbewahrt werden.

Analysis Note

Jede Charge des Mediums wird für ein optimales Zellwachstum und die optimale Proliferation von mesenchymalen Stammzellen getestet. Sterilitätsprüfung: negativ

Legal Information

Accutase is a registered trademark of Innovative Cell Technologies, Inc.

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

Sofern in unserem Katalog oder anderen Begleitdokumenten unserer Produkte nicht anders angegeben, sind unsere Produkte nur für Forschungszwecke vorgesehen und nicht für andere Zwecke zu verwenden, einschließlich, jedoch nicht beschränkt auf unautorisierte kommerzielle Verwendung, zur In-vitro-Diagnostik, für Ex-vivo- oder In-vivo-Therapiezwecke oder jegliche Art der Einnahme oder Anwendung bei Menschen oder Tieren.

Sicherheitshinweise

• Lagerklasse: 12 - Non Combustible Liquids
• wgk: WGK 1